【摘 要】
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目的 以肿瘤坏死因子α/放线菌素(TNF-α/act D)诱导细胞凋亡作为一种血管平滑肌细胞损伤模型,探讨组织蛋白酶B在TNF-α/act D诱导血管平滑肌细胞凋亡中的作用.方法 通过脂质体转染人主动脉平滑肌细胞株pcDNA3.1-组织蛋白酶B和pSilencer 2.1-组织蛋白酶B质粒,经过筛选鉴定建立组织蛋白酶B过表达组与基因沉默组,以TNF-α/act D诱导人主动脉平滑肌细胞凋亡,分别从
【机 构】
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目的 以肿瘤坏死因子α/放线菌素(TNF-α/act D)诱导细胞凋亡作为一种血管平滑肌细胞损伤模型,探讨组织蛋白酶B在TNF-α/act D诱导血管平滑肌细胞凋亡中的作用.方法 通过脂质体转染人主动脉平滑肌细胞株pcDNA3.1-组织蛋白酶B和pSilencer 2.1-组织蛋白酶B质粒,经过筛选鉴定建立组织蛋白酶B过表达组与基因沉默组,以TNF-α/act D诱导人主动脉平滑肌细胞凋亡,分别从细胞活性分析,形态学观察及凋亡蛋白检测细胞凋亡情况,并在组织蛋白酶B过表达细胞中加入组织蛋白酶抑制剂(E64d)和组织蛋白酶B特异性抑制剂(CA-074ME),观察细胞活性改变.结果 噻唑蓝分析正常培养条件下组织蛋白酶B过表达组、基因沉默组细胞活性和对照组无明显差别;经TNF-α/act D诱导后细胞活性明显降低,与对照组(14.60%±1.34%)比较,过表达组(9.98%±1.04%)明显下降,加入E64d、CA-074ME组(18.23%±1.05%,17.40%±1.03%)较过表达组活性增加;基因沉默组(21.30%±2.37%)活性增加;吖啶橙/溴化乙啶染色分析得到相似结果;Western印迹Bcl-2蛋白表达,基因沉默组显著高于对照组,而过表达组水平明显低于对照组,E64d、CA-074ME组的水平均明显高于过表达组.Bax蛋白表达在各组间差异无统计学意义.结论 过表达组织蛋白酶B能够促进TNF-α诱导的血管平滑肌细胞凋亡,而组织蛋白酶B基因沉默以及加入组织蛋白酶抑制剂可以抑制TNF-α诱导的血管平滑肌细胞凋亡。
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