【摘 要】
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目的 通过siRNA技术靶向抑制哮喘小鼠T细胞非受体酪氨酸蛋白激酶Lck的基因表达,研究Lck特异性siRNA对哮喘小鼠T细胞功能的影响.方法 化学法合成小鼠T细胞Lck基因21 - 23 bp的
【机 构】
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东阳市人民医院呼吸内科,复旦大学附属中山医院实验研究中心
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目的 通过siRNA技术靶向抑制哮喘小鼠T细胞非受体酪氨酸蛋白激酶Lck的基因表达,研究Lck特异性siRNA对哮喘小鼠T细胞功能的影响.方法 化学法合成小鼠T细胞Lck基因21 - 23 bp的RNA片段,以INTERFERinTMsiRNA Transfection Reagent作为转染试剂,将合成的siRNA片段转染哮喘小鼠脾脏来源的T细胞,作用48h后再与哮喘小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)混合反应48 h,收集细胞上清液,ELISA法检测细胞因子IL-4 、IL-13、IL-2、INF-γ; Western Blot法检测T细胞kk蛋白的含量,判断其表达是否被沉默.结果 siRNA干扰组T细胞中几乎检测不到Lck蛋白的表达,且其细胞上清液中IL-4、IL-13的水平(10.19±1.66、12.34±0.79)较非siRNA干扰组(28.06±2.88、27.87±1.61)及对照组(22.07±2.51、20.47±2.37)明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 特定的21 -23 bp的RNA片段能够以siRNA干扰的方式有效的抑制特定基因的表达,Lck特异性siRNA可以阻断哮喘小鼠T细胞的激活和分化,减少哮喘炎症因子的释放.
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