【摘 要】
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目的建立核酸内切酶改良型体外彗星实验方法，并应用该方法检测DNA氧化损伤。方法分别应用苯并[a]芘[B(a)P，20 μmol/L]、甲基磺酸甲酯[MMS，25 μg/ml]、秋水仙素(COL，5 mg/L)和长春新碱(VCR，0.5 mg/L)处理人支气管上皮(16HBE)细胞。采用噻唑蓝(MTT)实验评估细胞生存率，常规彗星实验和内切酶改良型彗星实验分别检测DNA损伤和氧化损伤，流式细胞术检测
【机 构】
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100050北京，中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所中国疾病预防控制中心化学污染与健康安全重点实验室；潍坊医学院公共卫生学院,100050北京，中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所中国疾病预
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目的建立核酸内切酶改良型体外彗星实验方法，并应用该方法检测DNA氧化损伤。
方法分别应用苯并[a]芘[B(a)P，20 μmol/L]、甲基磺酸甲酯[MMS，25 μg/ml]、秋水仙素(COL，5 mg/L)和长春新碱(VCR，0.5 mg/L)处理人支气管上皮(16HBE)细胞。采用噻唑蓝(MTT)实验评估细胞生存率，常规彗星实验和内切酶改良型彗星实验分别检测DNA损伤和氧化损伤，流式细胞术检测细胞内活性氧改变。
结果MTT实验显示，B(a) P、MMS、COL、VCR染毒后可引起较高水平的细胞内活性氧升高，4个组的细胞生存率分别为：(59.69±2.60)%、(54.33±2.81)%、(53.11±4.00)%、(51.43±3.92)%。常规彗星实验及甲酰胺嘧啶-DNA-糖基化(formamidopyrimidine-DNA-glycosylase，FPG)酶彗星实验均检测到B(a)P、MMS、COL、VCR引发的DNA损伤。FPG酶彗星实验中，Olive尾矩改变最明显，缓冲液组的B(a) P、MMS、COL、VCR组Olive尾矩分别为22.99±17.33、31.65±18.86、19.86±9.56和17.02±9.39，FPG酶处理后Olive尾矩分别为34.50±17.29、43.80±10.06、33.10±12.38和28.60±10.53，较缓冲液组分别增加58.94%、38.48%、66.86%和68.21% (t值分别为3.91、3.89、6.66和3.87，P值均<0.05)。相关性分析显示，Olive尾矩与细胞内活性氧也有较好的相关性(r＝0.77，P<0.05)。
结论FPG酶改良型彗星实验可以有效的检测遗传毒物所致的DNA氧化损伤改变。
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