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目的 探讨中性粒细胞颗粒蛋白(NGP)对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞生成一氧化氮(NO)的影响及其调控机制.方法 体外培养NGP高表达小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞(NGP/RAW)、阴性对照空载体RAW264.7细胞(NC/RAW)、NGP敲除RAW264.7细胞(NGP?KO/RAW)和野生型RAW264.7细胞(WT/RAW),取对数生长期细胞分别给予10?mg/L的LPS(LPS组)或磷酸盐缓冲液(PBS组)进行刺激.用Griess方法检测上清中NO含量;用定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA表达;用蛋白质免疫印迹试验(Western?blotting)检测iNOS蛋白及磷酸化转录激活因子1(p-STAT1)蛋白表达.结果 与PBS组相比,在LPS刺激后各时间点,4组细胞中iNOS?mRNA表达和NO产生量均明显增加,iNOS?mRNA表达于LPS刺激后12?h达峰值(2-ΔΔCt:NC/RAW细胞为38.45±1.34比1.00±0.00,NGP/RAW细胞为56.24±2.41比1.45±0.30,WT/RAW细胞为37.84±1.52比1.00±0.00,NGP?KO/RAW细胞为5.47±0.62比?0.98±0.40,均P<0.05),NO产生量于LPS刺激后24?h达峰值(μmol/L:NC/RAW细胞为24.15±1.26比0.15±?0.04,NGP/RAW细胞为58.80±2.11比0.18±0.02,WT/RAW细胞为25.04±1.80比0.16±0.02,NGP?KO/RAW细胞为2.42±0.38比0.12±0.03,均P<0.05).给予LPS刺激后,NGP/RAW细胞内iNOS?mRNA表达和?NO生成量较NC/RAW细胞明显增加〔iNOS?mRNA(2-ΔΔCt):2?h为8.42±0.59比4.63±0.37,6?h为27.16±1.60比?14.25±1.02,12?h为56.24±2.41比38.45±1.34;NO(μmol/L):6?h为4.12±0.25比2.23±0.17,12?h为16.50±?1.52比6.35±0.39,24?h为58.80±2.11比24.15±1.26,均?P<0.05〕;同时,p-STAT1和iNOS蛋白表达明显增强(p-STAT1/GAPDH:0?h为4.26±1.84比1.00±0.32,2?h为20.59±4.97比0.93±0.21,6?h为141.99±10.99比11.17±2.11;iNOS/GAPDH:0?h为1.27±0.86比1.00±0.22,2?h为7.94±1.94比2.01±0.92,6?h为24.24±4.88比3.72±1.11,均P<0.05),说明NGP可以通过促进转录激活因子1(STAT1)通路磷酸化来增加iNOS表达,进而使NO生成增多.LPS刺激后,NGP?KO/RAW细胞内iNOS?mRNA表达和NO生成量较?WT/RAW细胞明显减少〔iNOS?mRNA(2-ΔΔCt):2?h为2.46±0.31比4.22±0.18,6?h为3.61±0.44比13.02±?1.34,12?h为5.47±0.62比37.84±1.52;NO(μmol/L):6?h为1.22±0.19比2.01±0.12,12?h为1.60±0.44比5.15±0.62,24?h为2.42±0.38比25.04±1.80,均?P<0.05〕.说明NGP敲除后iNOS活化减少,进而使NO生成减少.结论?NGP可通过激活STAT1/iNOS通路正向调控活化巨噬细胞中NO的生成.