论文部分内容阅读
摘 要 目的:研究天麻多糖对小鼠免疫功能的影响。方法:3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法测定水不溶性天麻多糖的单糖含量;纸层析法分析水不溶性天麻多糖的单糖组成成分;测定小鼠血清中免疫球蛋白的含量,称量小鼠的脾脏和胸腺的重量,并计算出脾脏指数和胸腺指数。结果:水不溶性天麻多糖主要由葡萄糖组成,其含量为92.1%,该多糖能提高免疫抑制小鼠的免疫球蛋白含量(P<0.01),同时也能升高免疫抑制小鼠的胸腺指数(P<0.05)。结论:天麻多糖具有免疫调节作用,有良好的开发利用价值。
关键词 天麻多糖 葡萄糖 抗体
天麻(Gastrodiae elata Bl.)属兰科多年生草本寄生植物,以地下块茎入药。为传统名贵中药材,具有两千多年的应用历史,在我国中药市场长期畅销品种中占有极其重要的地位。现代药理试验表明,天麻具有镇静、镇痛、抗惊厥、降压、抗炎、抗氧化、延缓衰老等作用[1]。天麻含有天麻素、香草醛、对羟基苯甲醛等多种成分。据报道天麻中含有3种杂多糖:GF—ⅠGF—Ⅱ,GF—Ⅲ,GF—Ⅰ组成为葡萄糖:甘露糖:木糖:阿拉伯糖=70:1:0.5:0.3;GF—Ⅱ组成为葡萄糖:甘露糖=19:1;GF—Ⅱ是葡萄糖及微量甘露糖,3种多糖均具有细胞免疫活性[2]。天麻还含有大量不溶性多糖,传统提取工艺中将天麻多糖作废物丢弃,为了更好地充分利用天麻,本次实验对天麻水不溶性多糖的组成及其免疫活性进行了研究。
1 实验材料
药品:3,5-二硝基水杨酸(北京华美互利生物化工)、注射用环磷酰胺(CY)(上海第十二制药厂)、邻苯二甲酸(上海化学试剂有限公司)、苯胺(上海三浦化工有限公司)、葡萄糖(新乡高金药业有限公司)、天麻(宜昌天麻研究所提供红天麻)。
动物:KM纯系小鼠,18-22g,华中科技大学同济医学部实验动物中心提供。合格证号:19--052。
仪器:全自动生化分析仪700型(美国贝克漫);AL204电子天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司];紫外分光光度计(尤尼柯(上海)仪器有限公司);DK—S26电热恒温水浴锅(上海业宏实验设备有限公司)。
2 实验方法与结果
2.1 样品制备
取鲜天麻,去皮,均浆,经双层纱布过滤,滤液3000G离心,分离上清液和白色沉淀,分别干燥得天麻水提物和天麻多糖。
2.2 标准葡萄糖曲线制备及糖含量测定
准确称取标准葡萄糖100mg用蒸馏水定容至100ml,分别吸取0.1,0.2,0.3,0.4,0.5ml,定容至0.5ml,加入DNS试剂[3]0.5ml,沸水浴加热5min后冷却,用蒸馏水定容至5ml,以0.5ml蒸馏水按同样显色操作为正常对照,于540nm处测光密度。以葡萄糖微克数为横坐标,光密度为纵坐标,得标准曲线回归方程:y=0.8091x(R=0.9984)。
取天麻多糖1g溶于15ml水中并加10ml 6mol/L的HCL,混匀后,在沸水浴中加热1h,冷却,用NaOH中和水解液至中性,过滤,定容至1 000ml,从中取0.5ml,按上述步骤操作,测光密度,测得总糖含量(干重)为91.2%。
2.3 定性分析
天麻多糖组分的鉴定方法:纸层析(上行法),展开剂:正丁醇:乙醇:水=5:3:2;显色剂:邻苯二甲酸-苯胺试剂。将上述水解样品溶液配成1%(W/V)与葡萄糖标准品及二者的混合物分别点于层析纸(市售新华中速层析纸)上,20℃下展开3h,显色。结果均为单一斑点,且Rf值相一致,表明水不溶性天麻多糖为葡聚糖。
2.4免疫活性试验
2.4.1 实验方法
取KM小鼠,雌雄各半,随机分成6组,天麻多糖高剂量组,天麻多糖低剂量组,天麻水提物高剂量组,天麻水提物低剂量组,模型组和正常对照组,分别灌胃给药,给药量为0.1ml/10g,模型组与正常对照组灌胃等体积蒸馏水,除正常对照组外,小鼠每隔1日腹腔注射CY(0.4g/kg),连续7d。未次给药后30min从眼眶后静脉取血,分离血清,测定免疫球蛋白含量。结果见表1。另取脾脏、胸腺,称重,并计算脾脏指数和胸腺指数(g/100g)。结果见表2。
![](https://www.soolun.com/img/pic.php?url=http://img.resource.qikan.cn/qkimages/mzmj/mzmj200702/mzmj20070236-1-l.jpg)
2.4.2统计学处理
采用方差分析,数据处理采用SPSS11.5软件。
3 讨论
免疫调节功能是维护机体健康的重要保证,中药中多种多糖对免疫功能具有重要的调节作用,如当归多糖、人参多糖、黄芪多糖等。研究表明天麻中3种杂多糖均具有细胞免疫活性。而天麻含有大量不溶性多糖,实验证明为葡聚糖,研究表明天麻多糖能增强体液免疫,对细胞免疫亦有一定调节作用。
实验表明天麻中天麻多糖的含量高达70%,而天麻水提物含量不到20%。实验结果表明天麻多糖免疫调节作用优于天麻水提物,一种良好的免疫调节剂,具有良好的开发应用价值,有待于进一步开发利用。
参考文献
1 沈映君.中药药理学[M].北京:人民卫生出版社,2000:797—801
2 郝小燕,谭宁华,周俊.黔产天麻多糖的化学成分[J].云南植物研究,2000,22(1):81—84
3 董晓燕.生物化学实验[M].化学工业出版社,北京,2003:34—37
(收稿日期:2006年10月24日)
关键词 天麻多糖 葡萄糖 抗体
天麻(Gastrodiae elata Bl.)属兰科多年生草本寄生植物,以地下块茎入药。为传统名贵中药材,具有两千多年的应用历史,在我国中药市场长期畅销品种中占有极其重要的地位。现代药理试验表明,天麻具有镇静、镇痛、抗惊厥、降压、抗炎、抗氧化、延缓衰老等作用[1]。天麻含有天麻素、香草醛、对羟基苯甲醛等多种成分。据报道天麻中含有3种杂多糖:GF—ⅠGF—Ⅱ,GF—Ⅲ,GF—Ⅰ组成为葡萄糖:甘露糖:木糖:阿拉伯糖=70:1:0.5:0.3;GF—Ⅱ组成为葡萄糖:甘露糖=19:1;GF—Ⅱ是葡萄糖及微量甘露糖,3种多糖均具有细胞免疫活性[2]。天麻还含有大量不溶性多糖,传统提取工艺中将天麻多糖作废物丢弃,为了更好地充分利用天麻,本次实验对天麻水不溶性多糖的组成及其免疫活性进行了研究。
1 实验材料
药品:3,5-二硝基水杨酸(北京华美互利生物化工)、注射用环磷酰胺(CY)(上海第十二制药厂)、邻苯二甲酸(上海化学试剂有限公司)、苯胺(上海三浦化工有限公司)、葡萄糖(新乡高金药业有限公司)、天麻(宜昌天麻研究所提供红天麻)。
动物:KM纯系小鼠,18-22g,华中科技大学同济医学部实验动物中心提供。合格证号:19--052。
仪器:全自动生化分析仪700型(美国贝克漫);AL204电子天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司];紫外分光光度计(尤尼柯(上海)仪器有限公司);DK—S26电热恒温水浴锅(上海业宏实验设备有限公司)。
2 实验方法与结果
2.1 样品制备
取鲜天麻,去皮,均浆,经双层纱布过滤,滤液3000G离心,分离上清液和白色沉淀,分别干燥得天麻水提物和天麻多糖。
2.2 标准葡萄糖曲线制备及糖含量测定
准确称取标准葡萄糖100mg用蒸馏水定容至100ml,分别吸取0.1,0.2,0.3,0.4,0.5ml,定容至0.5ml,加入DNS试剂[3]0.5ml,沸水浴加热5min后冷却,用蒸馏水定容至5ml,以0.5ml蒸馏水按同样显色操作为正常对照,于540nm处测光密度。以葡萄糖微克数为横坐标,光密度为纵坐标,得标准曲线回归方程:y=0.8091x(R=0.9984)。
取天麻多糖1g溶于15ml水中并加10ml 6mol/L的HCL,混匀后,在沸水浴中加热1h,冷却,用NaOH中和水解液至中性,过滤,定容至1 000ml,从中取0.5ml,按上述步骤操作,测光密度,测得总糖含量(干重)为91.2%。
2.3 定性分析
天麻多糖组分的鉴定方法:纸层析(上行法),展开剂:正丁醇:乙醇:水=5:3:2;显色剂:邻苯二甲酸-苯胺试剂。将上述水解样品溶液配成1%(W/V)与葡萄糖标准品及二者的混合物分别点于层析纸(市售新华中速层析纸)上,20℃下展开3h,显色。结果均为单一斑点,且Rf值相一致,表明水不溶性天麻多糖为葡聚糖。
2.4免疫活性试验
2.4.1 实验方法
取KM小鼠,雌雄各半,随机分成6组,天麻多糖高剂量组,天麻多糖低剂量组,天麻水提物高剂量组,天麻水提物低剂量组,模型组和正常对照组,分别灌胃给药,给药量为0.1ml/10g,模型组与正常对照组灌胃等体积蒸馏水,除正常对照组外,小鼠每隔1日腹腔注射CY(0.4g/kg),连续7d。未次给药后30min从眼眶后静脉取血,分离血清,测定免疫球蛋白含量。结果见表1。另取脾脏、胸腺,称重,并计算脾脏指数和胸腺指数(g/100g)。结果见表2。
![](https://www.soolun.com/img/pic.php?url=http://img.resource.qikan.cn/qkimages/mzmj/mzmj200702/mzmj20070236-1-l.jpg)
2.4.2统计学处理
采用方差分析,数据处理采用SPSS11.5软件。
3 讨论
免疫调节功能是维护机体健康的重要保证,中药中多种多糖对免疫功能具有重要的调节作用,如当归多糖、人参多糖、黄芪多糖等。研究表明天麻中3种杂多糖均具有细胞免疫活性。而天麻含有大量不溶性多糖,实验证明为葡聚糖,研究表明天麻多糖能增强体液免疫,对细胞免疫亦有一定调节作用。
实验表明天麻中天麻多糖的含量高达70%,而天麻水提物含量不到20%。实验结果表明天麻多糖免疫调节作用优于天麻水提物,一种良好的免疫调节剂,具有良好的开发应用价值,有待于进一步开发利用。
参考文献
1 沈映君.中药药理学[M].北京:人民卫生出版社,2000:797—801
2 郝小燕,谭宁华,周俊.黔产天麻多糖的化学成分[J].云南植物研究,2000,22(1):81—84
3 董晓燕.生物化学实验[M].化学工业出版社,北京,2003:34—37
(收稿日期:2006年10月24日)