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摘 要 目的：研究天麻多糖对小鼠免疫功能的影响。方法：3，5-二硝基水杨酸(DNS)比色法测定水不溶性天麻多糖的单糖含量；纸层析法分析水不溶性天麻多糖的单糖组成成分；测定小鼠血清中免疫球蛋白的含量，称量小鼠的脾脏和胸腺的重量，并计算出脾脏指数和胸腺指数。结果：水不溶性天麻多糖主要由葡萄糖组成，其含量为92．1％，该多糖能提高免疫抑制小鼠的免疫球蛋白含量(P＜0．01)，同时也能升高免疫抑制小鼠的胸腺指数(P＜0．05)。结论：天麻多糖具有免疫调节作用，有良好的开发利用价值。
关键词 天麻多糖 葡萄糖 抗体
天麻(Gastrodiae elata Bl．)属兰科多年生草本寄生植物，以地下块茎入药。为传统名贵中药材，具有两千多年的应用历史，在我国中药市场长期畅销品种中占有极其重要的地位。现代药理试验表明，天麻具有镇静、镇痛、抗惊厥、降压、抗炎、抗氧化、延缓衰老等作用[1]。天麻含有天麻素、香草醛、对羟基苯甲醛等多种成分。据报道天麻中含有3种杂多糖：GF—ⅠGF—Ⅱ，GF—Ⅲ，GF—Ⅰ组成为葡萄糖：甘露糖：木糖：阿拉伯糖=70：1：0．5：0．3；GF—Ⅱ组成为葡萄糖：甘露糖=19：1；GF—Ⅱ是葡萄糖及微量甘露糖，3种多糖均具有细胞免疫活性[2]。天麻还含有大量不溶性多糖，传统提取工艺中将天麻多糖作废物丢弃，为了更好地充分利用天麻，本次实验对天麻水不溶性多糖的组成及其免疫活性进行了研究。
1 实验材料
药品：3，5-二硝基水杨酸(北京华美互利生物化工)、注射用环磷酰胺(CY)(上海第十二制药厂)、邻苯二甲酸(上海化学试剂有限公司)、苯胺(上海三浦化工有限公司)、葡萄糖(新乡高金药业有限公司)、天麻(宜昌天麻研究所提供红天麻)。
动物：KM纯系小鼠，18-22g，华中科技大学同济医学部实验动物中心提供。合格证号：19--052。
仪器：全自动生化分析仪700型(美国贝克漫)；AL204电子天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司]；紫外分光光度计(尤尼柯(上海)仪器有限公司)；DK—S26电热恒温水浴锅(上海业宏实验设备有限公司)。
2 实验方法与结果
2．1 样品制备
取鲜天麻，去皮，均浆，经双层纱布过滤，滤液3000G离心，分离上清液和白色沉淀，分别干燥得天麻水提物和天麻多糖。
2．2 标准葡萄糖曲线制备及糖含量测定
准确称取标准葡萄糖100mg用蒸馏水定容至100ml，分别吸取0．1，0．2，0．3，0．4，0．5ml，定容至0．5ml，加入DNS试剂[3]0．5ml，沸水浴加热5min后冷却，用蒸馏水定容至5ml，以0．5ml蒸馏水按同样显色操作为正常对照，于540nm处测光密度。以葡萄糖微克数为横坐标，光密度为纵坐标，得标准曲线回归方程：y＝0．8091x(R＝0．9984)。
取天麻多糖1g溶于15ml水中并加10ml 6mol／L的HCL，混匀后，在沸水浴中加热1h，冷却，用NaOH中和水解液至中性，过滤，定容至1 000ml，从中取0．5ml，按上述步骤操作，测光密度，测得总糖含量(干重)为91．2％。
2．3 定性分析
天麻多糖组分的鉴定方法：纸层析(上行法)，展开剂：正丁醇：乙醇：水＝5：3：2；显色剂：邻苯二甲酸－苯胺试剂。将上述水解样品溶液配成1％(W／V)与葡萄糖标准品及二者的混合物分别点于层析纸(市售新华中速层析纸)上，20℃下展开3h，显色。结果均为单一斑点，且Rf值相一致，表明水不溶性天麻多糖为葡聚糖。
2．4免疫活性试验
2．4．1 实验方法
取KM小鼠，雌雄各半，随机分成6组，天麻多糖高剂量组，天麻多糖低剂量组，天麻水提物高剂量组，天麻水提物低剂量组，模型组和正常对照组，分别灌胃给药，给药量为0．1ml／10g，模型组与正常对照组灌胃等体积蒸馏水，除正常对照组外，小鼠每隔1日腹腔注射CY(0．4g／kg)，连续7d。未次给药后30min从眼眶后静脉取血，分离血清，测定免疫球蛋白含量。结果见表1。另取脾脏、胸腺，称重，并计算脾脏指数和胸腺指数(g／100g)。结果见表2。
2．4．2统计学处理
采用方差分析，数据处理采用SPSS11．5软件。
3 讨论
免疫调节功能是维护机体健康的重要保证，中药中多种多糖对免疫功能具有重要的调节作用，如当归多糖、人参多糖、黄芪多糖等。研究表明天麻中3种杂多糖均具有细胞免疫活性。而天麻含有大量不溶性多糖，实验证明为葡聚糖，研究表明天麻多糖能增强体液免疫，对细胞免疫亦有一定调节作用。
实验表明天麻中天麻多糖的含量高达70％，而天麻水提物含量不到20％。实验结果表明天麻多糖免疫调节作用优于天麻水提物，一种良好的免疫调节剂，具有良好的开发应用价值，有待于进一步开发利用。
参考文献
1 沈映君．中药药理学[M]．北京：人民卫生出版社，2000：797—801
2 郝小燕，谭宁华，周俊．黔产天麻多糖的化学成分[J]．云南植物研究，2000，22(1)：81—84
3 董晓燕．生物化学实验[M]．化学工业出版社，北京，2003：34—37
(收稿日期：2006年10月24日)
关键词 天麻多糖 葡萄糖 抗体
天麻(Gastrodiae elata Bl．)属兰科多年生草本寄生植物，以地下块茎入药。为传统名贵中药材，具有两千多年的应用历史，在我国中药市场长期畅销品种中占有极其重要的地位。现代药理试验表明，天麻具有镇静、镇痛、抗惊厥、降压、抗炎、抗氧化、延缓衰老等作用[1]。天麻含有天麻素、香草醛、对羟基苯甲醛等多种成分。据报道天麻中含有3种杂多糖：GF—ⅠGF—Ⅱ，GF—Ⅲ，GF—Ⅰ组成为葡萄糖：甘露糖：木糖：阿拉伯糖=70：1：0．5：0．3；GF—Ⅱ组成为葡萄糖：甘露糖=19：1；GF—Ⅱ是葡萄糖及微量甘露糖，3种多糖均具有细胞免疫活性[2]。天麻还含有大量不溶性多糖，传统提取工艺中将天麻多糖作废物丢弃，为了更好地充分利用天麻，本次实验对天麻水不溶性多糖的组成及其免疫活性进行了研究。
1 实验材料
药品：3，5-二硝基水杨酸(北京华美互利生物化工)、注射用环磷酰胺(CY)(上海第十二制药厂)、邻苯二甲酸(上海化学试剂有限公司)、苯胺(上海三浦化工有限公司)、葡萄糖(新乡高金药业有限公司)、天麻(宜昌天麻研究所提供红天麻)。
动物：KM纯系小鼠，18-22g，华中科技大学同济医学部实验动物中心提供。合格证号：19--052。
仪器：全自动生化分析仪700型(美国贝克漫)；AL204电子天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司]；紫外分光光度计(尤尼柯(上海)仪器有限公司)；DK—S26电热恒温水浴锅(上海业宏实验设备有限公司)。
2 实验方法与结果
2．1 样品制备
取鲜天麻，去皮，均浆，经双层纱布过滤，滤液3000G离心，分离上清液和白色沉淀，分别干燥得天麻水提物和天麻多糖。
2．2 标准葡萄糖曲线制备及糖含量测定
准确称取标准葡萄糖100mg用蒸馏水定容至100ml，分别吸取0．1，0．2，0．3，0．4，0．5ml，定容至0．5ml，加入DNS试剂[3]0．5ml，沸水浴加热5min后冷却，用蒸馏水定容至5ml，以0．5ml蒸馏水按同样显色操作为正常对照，于540nm处测光密度。以葡萄糖微克数为横坐标，光密度为纵坐标，得标准曲线回归方程：y＝0．8091x(R＝0．9984)。
取天麻多糖1g溶于15ml水中并加10ml 6mol／L的HCL，混匀后，在沸水浴中加热1h，冷却，用NaOH中和水解液至中性，过滤，定容至1 000ml，从中取0．5ml，按上述步骤操作，测光密度，测得总糖含量(干重)为91．2％。
2．3 定性分析
天麻多糖组分的鉴定方法：纸层析(上行法)，展开剂：正丁醇：乙醇：水＝5：3：2；显色剂：邻苯二甲酸－苯胺试剂。将上述水解样品溶液配成1％(W／V)与葡萄糖标准品及二者的混合物分别点于层析纸(市售新华中速层析纸)上，20℃下展开3h，显色。结果均为单一斑点，且Rf值相一致，表明水不溶性天麻多糖为葡聚糖。
2．4免疫活性试验
2．4．1 实验方法
取KM小鼠，雌雄各半，随机分成6组，天麻多糖高剂量组，天麻多糖低剂量组，天麻水提物高剂量组，天麻水提物低剂量组，模型组和正常对照组，分别灌胃给药，给药量为0．1ml／10g，模型组与正常对照组灌胃等体积蒸馏水，除正常对照组外，小鼠每隔1日腹腔注射CY(0．4g／kg)，连续7d。未次给药后30min从眼眶后静脉取血，分离血清，测定免疫球蛋白含量。结果见表1。另取脾脏、胸腺，称重，并计算脾脏指数和胸腺指数(g／100g)。结果见表2。
2．4．2统计学处理
采用方差分析，数据处理采用SPSS11．5软件。
3 讨论
免疫调节功能是维护机体健康的重要保证，中药中多种多糖对免疫功能具有重要的调节作用，如当归多糖、人参多糖、黄芪多糖等。研究表明天麻中3种杂多糖均具有细胞免疫活性。而天麻含有大量不溶性多糖，实验证明为葡聚糖，研究表明天麻多糖能增强体液免疫，对细胞免疫亦有一定调节作用。
实验表明天麻中天麻多糖的含量高达70％，而天麻水提物含量不到20％。实验结果表明天麻多糖免疫调节作用优于天麻水提物，一种良好的免疫调节剂，具有良好的开发应用价值，有待于进一步开发利用。
参考文献
1 沈映君．中药药理学[M]．北京：人民卫生出版社，2000：797—801
2 郝小燕，谭宁华，周俊．黔产天麻多糖的化学成分[J]．云南植物研究，2000，22(1)：81—84
3 董晓燕．生物化学实验[M]．化学工业出版社，北京，2003：34—37
(收稿日期：2006年10月24日)