【摘 要】
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目的 建立双抗体夹心ELISA定量检测人血清高尔基蛋白73(GP73)的方法,并用于检测血清GP73含量.方法 利用杂交瘤法制备纯化的抗GP73单克隆抗体(mAb)进行辣根过氧化物酶(HRP)标
【机 构】
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南京医科大学第二附属医院普通外科,江苏省,210011;卫生部肠道病原微生物重点实验室 江苏省疾病预防控制中心病原微生物研究所
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目的 建立双抗体夹心ELISA定量检测人血清高尔基蛋白73(GP73)的方法,并用于检测血清GP73含量.方法 利用杂交瘤法制备纯化的抗GP73单克隆抗体(mAb)进行辣根过氧化物酶(HRP)标记后,通过棋盘滴定法确定包被抗体和酶标抗体及其最适工作浓度；以重组人的GP73抗原为标准品建立标准曲线；以重复性、灵敏性和回收率实验评价ELISA方法.应用该ELISA法对正常人、肝炎、肝硬化及肝癌患者血清中的GP73水平进行定量检测.结果 当抗GP73 mAb 3D5A10和7H3F5分别为捕获抗体和酶标抗体、工作浓度分别为40 μg/ml和1∶ 4000时,双抗体夹心ELISA法最优.该方法的平均批内和批间变异系数分别为4.6％和7.6％,灵敏度达3.76 ng/ml,平均回收率为(102.2±5)％.用本方法重复测定肝癌(33例)、肝硬化(28例)、乙型肝炎(44例)及正常人(44例)血清样本中GP73浓度(中位数)分别为25.9、27.6、16.7、9.9μg/L;除肝癌与肝硬化组间差异无统计学意义外,其余各组间均有统计学差异(P＜0.05).结论 成功建立了双抗体夹心ELISA定量检测GP73的方法.检测血清GP73可作为诊断肝脏疾病的重要辅助手段之一.
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