【摘 要】
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水稻OsbHLH116基因属于bHLH家族转录因子.本研究依据简易RNAi技术原理,在OsbHLH116基因编码区选取一段60bp序列作为干扰目的片段,根据目的片段序列化学合成2条长寡核苷酸链,
【机 构】
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河南农业大学农学院,河南粮食作物协同创新中心,河南省水稻生物学重点实验室,郑州,450002
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水稻OsbHLH116基因属于bHLH家族转录因子.本研究依据简易RNAi技术原理,在OsbHLH116基因编码区选取一段60bp序列作为干扰目的片段,根据目的片段序列化学合成2条长寡核苷酸链,使其3’端9个碱基互补配对,经退火延伸得到具有反向重复序列的小干扰片段.小干扰片段和载体pTCK303经一次酶切和连接即可得到OsbHLH116-RNAi表达载体.经菌落PCR验证后利用农杆菌介导法转化水稻品种新丰2号,利用GUS染色筛选获得转基因阳性植株.通过qRT-PCR对选取的三组转基因株系中OsbHLH116基因表达量验证,结果显示OsbHLH116基因表达极显著降低,表明OsbHLH116基因简易RNAi载体构建成功并发挥干扰作用.对OsbHLH116基因功能进行初步分析发现,与野生型新丰2号相比,OsbHLH116-RNAi株系种子萌发率显著降低.
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