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目的
探讨局部转染基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)基因预防显微血管吻合术后血栓形成的效果。
方法2014年6月至2015年4月,利用基因工程技术构建SDF-1α基因重组质粒。使用体质量300~350 g的SD大鼠60只,其中15只大鼠左下肢肌肉内分别注射重组SDF-1α质粒、空载质粒及生理盐水,注射前及注射后第3、7、14、28天,利用ELISA试剂盒检测血浆SDF-1α水平;另外45只大鼠随机分为3组,分别注射重组质粒、空载质粒及生理盐水。注射后第7天,将所有大鼠左侧股动脉挤压离断后行端端血管吻合。术后15 min、30 min及2 h,利用通畅实验检测吻合口是否堵塞;术后2 h取吻合口股动脉标本采用HE染色、扫描电镜检测血栓形成情况,RT-PCR检测相关基因转录水平。
结果大鼠下肢局部注射重组SDF-1α质粒后外周血SDF-1α水平短暂升高,第7天达到高峰,第28天基本恢复正常水平。术后2 h,重组质粒组通畅率(60%)高于空载质粒组及生理盐水组(均为20%),差异具有统计学意义(P<0.05)。苏木素-伊红(HE)染色显示重组质粒组血栓堵塞面积百分比为(52.00 ± 36.27)%,小于[生理盐水组(84.30 ± 22.59)%和质粒对照组[(85.40 ± 18.93%)],差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果发现术后2 h,重组质粒组内皮型一氧化氮合酶基因转录水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。扫描电镜提示重组质粒组血栓明显少于对照组。
结论局部转染SDF-1α基因能够抑制显微血管吻合术后吻合口血栓形成,提高吻合口通畅率,可能与局部内皮型一氧化氮合酶转录水平增高有关。上述结果为显微外科血管吻合术后血栓的预防提供新的方法。