【摘 要】
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为研制马立克病病毒RB1B超强毒株致瘤蛋白Meq单克隆抗体,本研究通过聚合酶链式反应(PCR)扩增马立克病病毒(Md5)meq基因5′端第1~507位核苷酸,将其克隆入原核表达载体p Cold-T
【机 构】
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南京农业大学动物医学院; 安徽科技学院家禽疫病防控监测安徽省重点实验室; 中国农业科学院上海兽医研究所;
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目(31472218,31572502);江苏省自然科学青年基金项目(BK20140711);留学回国人员科研启动基金(教外司留[2014]1685号);中央高校基本业务费(Y0201300527);江苏高校优势学科建设工程资助项目(2010)
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为研制马立克病病毒RB1B超强毒株致瘤蛋白Meq单克隆抗体,本研究通过聚合酶链式反应(PCR)扩增马立克病病毒(Md5)meq基因5′端第1~507位核苷酸,将其克隆入原核表达载体p Cold-TF,转化到BL21(DE3)感受态中,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对表达产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行检测。用融合蛋白His-Meq169腹腔免疫BALB/c小鼠,利用间接免疫荧光(IFA)和Western-blot检测多抗血清;血清检测阳性后,取小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,利用IFA和有限稀释法筛选阳性单克隆杂交瘤细胞株,最后筛选出了4株阳性杂交瘤细胞株,即1C11、3E4、3G10和5H11。将获得的单抗经IFA方法检测强毒株Md5或弱毒株CVI988感染的CEF细胞,结果显示,Meq单抗可特异性识别MDV感染形成的细胞空斑。这为进一步研究Meq的生物学功能奠定了基础。
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