【摘 要】
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高效低背景T-载体的构建可显著提高克隆PCR产物的效率。笔者介绍1种在实验室常规条件下简单快捷制备高效低背景T载体的方法。将含有限制酶Xcm I酶切位点的ccd B致死基因作为
【机 构】
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海南大学农学院,海南大学海南省热带生物资源可持续利用重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地
【基金项目】
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国家自然科学基金(31360575), 海南大学优秀研究生学位论文培育计划(M8K3124001003002), “木薯和橡胶糖代谢、耐贫瘠和抗病抗理”项目(ZXBJH-XK001)
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高效低背景T-载体的构建可显著提高克隆PCR产物的效率。笔者介绍1种在实验室常规条件下简单快捷制备高效低背景T载体的方法。将含有限制酶Xcm I酶切位点的ccd B致死基因作为插入DNA片段连接到p MD19-T Simple Vector骨架上得到重组质粒,通过菌落PCR、酶切分析及测序验证正确的重组质粒经限制酶Xcm I酶切即得到T-载体。该T-载体含有的ccd B致死基因可以降低载体自连的背景干扰,提高了T-A克隆效率,具有较高的阳性克隆率,继承了p MD19-T Simple Vector的优点,与普通T-载体相比,还具有高效、低背景的优越性。整个操作过程简易可行,具备一定的应用前景。
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