【摘 要】
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目的 探究萝卜硫素（sulforaphane, SFN）对肝细胞损伤及自噬的影响及机制。方法 用200μmol/L棕榈酸（palmitic acid, PA）处理人正常肝细胞株（HHL5）24 h建立肝细胞损伤模型组（PA组）,用5μmol/L的SFN与200μmol/L PA共同处理细胞24 h为实验组（PA+SFN组）,溶剂处理为对照组。CCK-8检测细胞增殖活力；CELLROXTM DEEP
【基金项目】
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国家自然科学基金（82103820）～～；
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目的 探究萝卜硫素（sulforaphane, SFN）对肝细胞损伤及自噬的影响及机制。方法 用200μmol/L棕榈酸（palmitic acid, PA）处理人正常肝细胞株（HHL5）24 h建立肝细胞损伤模型组（PA组）,用5μmol/L的SFN与200μmol/L PA共同处理细胞24 h为实验组（PA+SFN组）,溶剂处理为对照组。CCK-8检测细胞增殖活力；CELLROXTM DEEP RED探针装载细胞后，流式细胞仪检测活性氧簇（reactive oxygen species, ROS）水平；试剂盒检测细胞内丙二醛（Malondialdehyde, MDA）水平；qPCR检测炎症标志物IL-1β、TNF-α转录水平；蛋白免疫印迹检测自噬相关蛋白SQSTM1及LC3Ⅱ蛋白表达水平；提取细胞总RNA进行全基因转录组测序，分析数据筛选差异基因，并对差异基因进行KEGG通路富集分析；用PCSK9 siRNA转染HHL5细胞，qPCR检测PCSK9转录水平，流式细胞仪检测ROS水平，蛋白免疫印迹检测SQSTM1及LC3Ⅱ蛋白表达水平。结果 相对于PA组，SFN干预后HHL5细胞增殖活力升高，MDA含量以及ROS水平降低；PA组SQSTM1、LC3Ⅱ蛋白表达升高，SFN干预后SQSTM1表达降低，LC3Ⅱ表达进一步升高；转录组数据分析发现差异基因主要富集于自噬通路，并筛选出目标基因PCSK9;相对于对照组，PA组的PCSK9转录水平升高，SFN干预后PCSK9转录水平降低；PA组在PCSK9敲降后，与未敲降的PA组比，细胞内ROS水平有所降低，和SFN降低ROS趋势一致，PCSK9敲降后自噬蛋白SQSTM1表达降低，LC3Ⅱ表达水平升高，和SFN恢复自噬流的趋势一致。结论 SFN可以改善PA引起的肝细胞损伤，其机制可能与其抑制PCSK9转录从而调控自噬流有关。
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