大鼠IL-6基因siRNA表达载体的构建

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目的:构建具有特异性阻断大鼠白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)基因的小干扰RNA (small interferening RNA ,siRNA)表达载体.方法:应用siRNA设计软件在大鼠IL-6基因的mRNA上寻找特异性的短核苷酸序列,并设计合成两条互补小发夹结构的DNA序列,经退火后形成双链DNA片段, 采用基因克隆技术,将其克隆到pSilencerTM1.0-U6的载体中, 转化DH5α大肠杆菌,提取质粒,酶切方法和测序法对重组体进行鉴定.结果:酶切和测序结果表明,成功构建了大鼠IL-6基因的siRNA表达载体.结论:成功构建了siRNA表达载体,为今后利用RNAi 技术在大鼠动物模型上研究疾病的发病机理、药物作用靶点提供先进的技术平台.
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