目的建立苗药虎耳草药材的HPLC指纹图谱及5种成分定量测定方法,为虎耳草质量控制提供参考。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相,进行梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min,检测波长254 nm,柱温35℃。对21批不同产地的虎耳草建立HPLC指纹图谱,采用国家药典委员会"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)"对结果进行分析处理,并选取主要成分建立多指标测定方法。结果指纹图谱研究所建立的方法结果良好。21批不同产地虎耳草的HPLC指纹图谱中,确定11个共有峰,并指认了其中5个色谱峰,分别是原儿茶酸、没食子酸、岩白菜素、槲皮素-5-O-β-D-葡萄糖苷和槲皮苷,21批虎耳草药材与对照药材的相似度差异较大。将5个指认成分作为主成分建立多指标测定方法,其线性关系良好,范围分别为0.052 8~0.844 8、0.020 96~0.335 36、0.241 6~3.865 6、0.130 8~2.092 8和0.023 68~0.378 88μg;5种成分的回收率分别为96.64%、100.72%、96.62%、103.71%、96.75%,RSD均小于2%。21批药材中5种成分的质量分数分别在0.07~0.40、0.19~4.36、1.42~5.98、0.42~6.86、0.11~1.51 mg/g。结论所建立的方法简便可靠、耐用性好,可作为虎耳草药材质量控制方法。