【摘 要】
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目的 :制备Ni2 + 亲和胶 ,并检测其纯化带His6 标签融合蛋白的效果。方法 :在强碱条件下 ,用环氧氯丙烷活化Sepharose 4B后 ,接上多个IDA臂 ,将Ni2 + 连接在IDA臂上 ,即为亲
【机 构】
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军事医学科学院放射医学研究所; 军事医学科学院放射医学研究所 北京100850; 北京100850; 北京100850;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目 ( 3 0 0 0 0 0 86和3 0 0 0 0 195 )
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目的 :制备Ni2 + 亲和胶 ,并检测其纯化带His6 标签融合蛋白的效果。方法 :在强碱条件下 ,用环氧氯丙烷活化Sepharose 4B后 ,接上多个IDA臂 ,将Ni2 + 连接在IDA臂上 ,即为亲和胶成品。用亲和胶分别在变性和非变性的条件下 ,纯化包涵体和可溶性表达的带His6 标签的人TRF1和人tankyrase的PARP结构域 ,并通过Western印迹鉴定纯化的靶蛋白。结果 :用自制的Ni2 + 亲和胶可以获得SDS_PAGE单一条带的目的蛋白 ,并得到Western印迹的鉴定。结论 :自制的Ni2 + 亲和胶对带His6 标签融合蛋白的纯化能力与商品胶完全等同 ,但价格低廉。
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