【摘 要】
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为了在体内实现萤火虫荧光素酶的生物素酰化修饰,将大肠杆菌中编码生物素羧基载体蛋白(biotin carboxyl carrier protein,BCCP)C端87个氨基酸的功能域基因融合到萤火虫(Pyroc
【机 构】
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华东医学生物技术研究所,中国药科大学生命科学与技术学院,南京大学医学院
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(0470454);日本日立中央研究所资助项目
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为了在体内实现萤火虫荧光素酶的生物素酰化修饰,将大肠杆菌中编码生物素羧基载体蛋白(biotin carboxyl carrier protein,BCCP)C端87个氨基酸的功能域基因融合到萤火虫(Pyrocoelia pectoralis)荧光素酶cDNA的末端。经大肠杆菌生物素合成酶(biotin holoenzyme synthetase)的催化,生物素与BCCP上特定的赖氨酸(Lys)残基共价结合,由此与BCCP融合的萤火虫荧光素酶间接实现了生物素化的修饰。利用生物素与配体亲和素或链霉亲和素的特异性耦合,可以将荧光素酶固定到亲和素或链霉亲和素包被的磁珠上,从而使荧光检测的应用更加灵活和方便。讨论了生物素化荧光素酶的克隆、表达以及功能检测。
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