【摘 要】
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目的纯化灭活SARS-CoV为研制马抗SARS-CoV免疫球蛋白提供抗原。方法将灭活的SARS-CoV悬液超滤浓缩,用Sepharose4FastFlow分子筛和阴离子交换柱层析纯化,用高效液相色谱、SDS-
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目的纯化灭活SARS-CoV为研制马抗SARS-CoV免疫球蛋白提供抗原。方法将灭活的SARS-CoV悬液超滤浓缩,用Sepharose4FastFlow分子筛和阴离子交换柱层析纯化,用高效液相色谱、SDS-PAGE和电镜观察测定抗原的纯度。结果将01、02和03三批SARS-CoV悬液分别进行11.2倍、12.5倍和25.0倍超滤浓缩,抗原的回收率依次为48.6%、46.3%和55.6%,凝胶过滤层析后抗原的回收率依次为81.6%、79.3%和86.0%。再经阴离子交换梯度层析进一步提高了抗原的纯度和浓度,蛋白的比活性由纯化前的0.11U/μg增加到1.44U/μg。电镜下观察到SARS-CoV抗原颗粒完整,呈圆形或椭圆形状,直径在80~120nm之间。SDS-PAGE显示主要条带位于Mr43000~66000之间,经质谱扫描分析确定该成分为Mr46000。高效液相层析法分析抗原纯度为97.0%。马抗SARS-CoV免疫球蛋白中和抗体效价在1∶6400~1∶12800之间。结论本研究为制备高效价的马抗SARS-CoV免疫球蛋白奠定了基础。
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