湘油15 PGIP9蛋白基因的克隆和蛋白序列结构分析及原核表达

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运用生物信息学软件对湘油15 PGIP9基因的核苷酸、蛋白氨基酸序列进行分析,并对其蛋白结构进行预测。结果表明:湘油15 PGIP9编码区CDS长1 011 bp,编码336个氨基酸的开放阅读框,分子量为37.5kDa,等电点为7.9。N端1~22个氨基酸是信号肽,且这一区域疏水性较强,具有5个潜在的N-糖基化位点。N端和C端还各具有4个参与二硫键形成的半胱氨酸残基。二级结构显示有11个α-螺旋,14个β-延伸和25个无规则卷曲。中心LRR结构域由6个串联的LRR基序组成。随后将PGIP9的CDS序列亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建pET-32a-PGIP9重组表达质粒,并转化E.coil BL21(DE3),25℃,终浓度为0.2 mmol/L和0.5 mmol/L的IPTG诱导2 h,都成功的表达了融合蛋白pET-32a-PGIP9,其分子量约为52kDa,发现主要以包涵体形式存在,没有可溶形式的蛋白表达。
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