论文部分内容阅读
目的
检测espO基因敲除对肠出血性大肠埃希菌(EHEC)生物学特性的影响。
方法自杀质粒pCVD442-ΔespO介导的两步法构建espO基因敲除菌株(ΔespO)，pTrc99a质粒构建espO基因回补突变株(CΔespO)，不同EHEC菌株感染HeLa细胞以了解espO基因在感染过程中的生物学功能与致死作用。
结果PCR和电泳以及基因测序结果表明，ΔespO和CΔespO突变株构建成功。与野生株相比，ΔespO和CΔespO突变株的生长速度无明显差异，表明espO基因不影响细菌的生长与繁殖。此外，EspO可激活肿瘤坏死因子(TNF)诱导的NF-κB信号通路，而效应蛋白NleB能够抑制该激活过程。在细菌感染细胞试验中，EspO不能抑制TNF和TRAIL(TNF-related apoptosis-inducing ligand)诱导的细胞死亡。
结论本研究成功构建了EHEC espO基因敲除和回补突变株菌株，初步探究了espO与宿主细胞的相互作用及该基因在感染过程中对细胞凋亡的影响，为后续深入研究细菌EspO蛋白的体外生物学活性以及体内感染过程中的致病作用提供实验依据。