【摘 要】
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目的 体外获得人源α-突触核蛋白并研究其与海洋小分子Pectinolide G的实际结合情况.方法 采用基因重组的方法构建α-突触核蛋白的原核重组表达载体并在BL21(DE3)中诱导蛋白
【机 构】
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中国海洋大学海洋药物教育部重点实验室,医药学院,山东青岛266003
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目的 体外获得人源α-突触核蛋白并研究其与海洋小分子Pectinolide G的实际结合情况.方法 采用基因重组的方法构建α-突触核蛋白的原核重组表达载体并在BL21(DE3)中诱导蛋白表达,从诱导温度、时间和诱导剂浓度三方面对蛋白表达进行优化,并确立硫酸铵纯化目的蛋白的具体条件,通过表面等离子共振技术和分子对接技术,探究人源α-突触核蛋白与Pectinolide G的结合情况.结果 通过基因重组将α-突触核蛋白基因与PET30a原核表达载体构建成融合载体,确立该蛋白的最佳诱导表达条件为0.5 mmol·L-1 IPTG,37℃,5h,最佳纯化条件为95℃加热破碎后的菌液,50％饱和硫酸铵溶液沉淀目的蛋白,质谱法确认其分子量为14.6 kDa,符合人源α-突触核蛋白理论分子量.最后,利用纯化得到的α-突触核蛋白通过表面等离子共振(SPR)和计算机分子模拟技术,确认了其可与Pectinolide G较好地结合.结论 通过原核重组表达获得人源α-突触核蛋白,并确认了其与海洋小分子Pectinolide G的结合力和结合模式.
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