人颗粒溶素活性片段原核表达载体的构建与鉴定

来源 :中国生物制品学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：sonicff8

【摘要】

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目的构建人颗粒溶素（GNLY）活性片段原核表达载体。方法采用RT-PCR技术从健康人外周单个核细胞中扩增出颗粒溶素活性片段cDNA，将其与表达载体pGEX-4T-1经限制性核酸内切酶双酶切

【作者】

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张雪燕韩跃武姚海燕谢俊秋张庆华

【机构】

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兰州大学基础医学院医学生物化学与分子生物学研究所

【出处】

：

中国生物制品学杂志

【发表日期】

：

2007年12期

【关键词】

：

人颗粒溶素活性片段原核表达 Human granulysin Active segment Prokaryotic expression

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目的构建人颗粒溶素（GNLY）活性片段原核表达载体。方法采用RT-PCR技术从健康人外周单个核细胞中扩增出颗粒溶素活性片段cDNA，将其与表达载体pGEX-4T-1经限制性核酸内切酶双酶切后连接，转化E．coli BL21，挑取阳性菌落．抽提重组质粒并鉴定。IFTG诱导表达GST融合蛋白，亲和层析纯化，SDS-PAGE分析表达和纯化结果，抑菌圈法鉴定表达产物的活性。结果重组质粒插入基因序列测定证实为颗粒溶素活性片段cDNA。表达产物经SDS-PAGE分析，在相对分子质量29000处出现一明显条带，与理论结

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