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[摘 要]目的：采用高效液相色谱法来对米沙拉嗪孔氏控释胶囊中的有关物质进行测定。方法：主要采用高效液相色谱法，其中流动相为磷酸盐缓冲液，其中包含甲醇、乙腈。将柱温控制在30摄氏度的范围内，流速为1.2ml？min-1，在检测的过程中可检测波长为220nm。结果：经过测定，发现在0.1994-1.994μg/ml的浓度范围内的3-氨基水杨酸可以和峰面积建立良好的线性关系，其中r=1.0000。从整体上看，回收率达到96.38%，其中RSD为1.7%左右。结论：采用高效液相色谱法来对美沙拉嗪控释胶囊的相关物质进行测定，具有一定的准确性和灵敏性，可以在以后的药物研究中进行大力推广。
[关键词]高效液相色谱法；美沙拉嗪；有关物质
中图分类号：P650.3 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）16-0387-01
在慢性疾病中，比较常见的就是溃疡性结肠炎，这种疾病的病变范围比较广，而且病情会呈现出反复发作的现象，而且很可能导致癌变，所以说，这种疾病的危害性极大，得到了医护人员的高度重视。从现如今临床诊疗方面来看，美沙拉嗪药物疗效显著。但是在药物应用的过程中还没有对其内部的相关标准进行规定，也就是说现如今，对于美沙拉嗪药物中的相关成分还没有进行完全的掌握，控制度不够。虽然有些药物研究著作中对原料进行了检测，但是药品的质量问题以及相应的不良反应还没有落实到位。所以，为了用药安全，有必要进行进一步的检测。进而为以后的药物使用提供相应的参考。
1、仪器与试药
在实验之前要对仪器和试药的准备好，其中高效液相色谱仪是必不可少的主要仪器。其中含有检测仪，自动化的进样箱以及色谱工作站等等。主要的试药就是美沙拉嗪控释胶囊，其生产批号和规格都符合国家药品监督总局的规定和要求，可以进行实验。除此之外，还有甲醇溶液，乙腈容易以及辛烷磺酸钠等等，试验中所应用的水分为娃哈哈水。
2、方法与结果
2.1 进行试品、对照品溶液等进行制备
采用细粉状的药品，降入流动相制备成1ml的溶液，其中包含美沙拉嗪0.5mg，将其作为供试品溶液，其精密度要达到实验检测的标准，其中加流动相准确稀释达到500倍，同时将其作为对照溶液。称取适量的氨基水杨酸，将其加入流动相进行溶解，并且支撑1ml的3-氨基水杨酸溶液，容量达到1μg，将其作为对照品溶液。最后要称取一定量的空白辅料，加入流动相制备成空白辅料溶液，在试验中进行对照分析。
2.2 波长选择实验
在实验的过程中，首先称取3-氨基水杨酸溶液置于量瓶中，溶质大约为10mg左右，然后加入适量的流动相进行稀释，观察溶液溶解之后刻度的指数范围。然后去其中的2ml，将其置于量瓶中，同样待其稀释后，摇匀。然后根据照紫外-可见分光光度法来对波长的范围进行控制，为了保证波长范围确定的准确性还需要进行扫描。经过实验的检测可知，波长在297nm处时，吸收率最大，习惯度达到0.219。对于美沙拉嗪药物来说，波长在220nm处时，其吸收率最大，所謂将最终的波长控制在220nm。
2.3 色谱条件和系统适用性试验
在本次试验中主要采用的填充剂是辛烷基硅烷键合硅胶，将柱温控制在30℃的范围内，流动相主要由磷酸盐缓冲液组成，其中包括甲醇和乙腈。其中检测的波长为220nm，采用的进样量为20μl。
取约10mg的美沙拉嗪，将其置于100ml量瓶中，加入流动相溶液进行搅拌稀释。然后取出精密的试样1豪生，放置到100ml的量瓶中，在其中加入3-氨基水杨酸溶液，同时将其搅拌均匀，将得到的溶液作为适用性溶液，为了保证保证实验的准确性，需要将美沙拉嗪峰和3-氨基水杨酸的分离度进行控制。
2.4 专属性实验
2.4.1在实验之前制取的所用溶液中各取20μl，将其诸如液相色谱仪中，根据色谱图的变化情况来做好相关的记录。
2.4.2破坏实验
分别对样品进行酸、碱、氧化、高温、高湿和光照破坏。上述破坏样品，按照2.1项下的配制方法分别加流动相稀释至刻度，作为供试溶液，照上述色谱条件，分别进样20μl测定，按美沙拉嗪保留时间的3倍记录色谱图。结果表明：本品对酸、高温、高湿、光照条件较为稳定，对碱、氧化剂不稳定，尤其对碱破坏更明显。本色谱条件可以检出降解产物，且杂质峰与主峰分离度良好，具有较好的专属性。
2.5 检测限试验
精密称取美沙拉嗪对照品溶液经多次稀释，进样测定，以信噪比为3：1时相应浓度为确定最低检测限。测得美沙拉嗪的最低检出量为16.65ng，进样量20μl。
2.6 定量限试验
精密称取3-氨基水杨酸对照品溶液多次稀释，以信噪比为10：1时相应的浓度为定量限。测得3-氨基水杨酸定量限为86.69ng/ml。另外配制6份最低定量限浓度的溶液进样，所测6份溶液色谱峰保留时间的相对标准差（RSD）为0.16%，峰面积的相对标准差（RSD）为2.66%。
2.7 线性范围
精密称取3-氨基水杨酸杂质对照品适量，加流动相稀释制成每1mL中约含10μg的3-氨基水杨酸溶液，作为对照品溶液贮备液。分别移取贮备液加流动相稀释使成浓度为0.2μg/ml～2.0μg/ml的系列溶液，分别精密量取上述溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图；以3-氨基水杨酸的浓度为横坐标（X），以相对应的峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，结果表明本品在0.1994～1.994μg/ml浓度范围内，线性方程为A=650777.1327C-323.5245，γ=1.000，线性关系良好。
2.8 准确度试验
取3-氨基水杨酸对照品10mg，置100ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液取上述储备液5ml置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为储备液；取3-氨基水杨酸对照品15mg，置100ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密称取样品适量（约相当于美沙拉嗪50mg）3份于100ml量瓶中，加入1ml贮备液，用流动相稀释至刻度；精密称取样品适量（约相当于美沙拉嗪50mg）3份于100ml量瓶中，加入1ml贮备液，用流动相稀释至刻度，摇匀；精密称取样品适量（约相当于美沙拉嗪50mg）3份于100ml量瓶中，加入1ml贮备液，用流动相稀释至刻度，摇匀。取上述样品20μl进样测定；另取3-氨基水杨酸对照品，以外标法计算回收率。结果：平均回收率为96.38%，RSD分别为1.71%。
3、讨论
3.1 检测波长的选择
根据文献，美沙拉嗪及其相关杂质大都在220nm处有最大吸收，并参照《美国药典》、《英国药典》有关物质项下的色谱条件，将检测波长确定为220nm。
3.2 色谱柱的选择
从现行的各国药典中看，美国药典及英国药典原料药均采用C8柱，美国药典采用C8短柱，英国药典采用C8长柱，但实验中发现用C8短柱主峰峰形不甚理想，影响杂质的检测，经试验比较，最终将色谱柱确定为C8长柱。
3.3 色谱条件的选择
《美国药典》34版采用磷酸盐缓冲液-甲醇-乙腈作为流动相，主峰与相邻杂质峰及定量杂质峰均得到很好的分离，《英国药典》采用高氯酸、磷酸水溶液和高氯酸、磷酸乙腈溶液进行梯度洗脱，主峰出峰时间短，与相邻破坏杂质峰未完全分离，达不到理想的分离效果，故采用《美国药典》有关物质色谱条件。
3.4对色谱条件进行耐用性试验，其变动因素：柱温（25℃、30℃、35℃）、流速相对值变化±17%、流动相值变化±0.2pH单位、流动相比例变化±10%及不同厂家的色谱柱。耐用性试验结果表明：所有参数变化结果对测定几乎无影响，所有条件变化均不影响测定结果，方法学验证结果也表明本法专属性强，准确度高，重现性好，是较理想的方法。
3.5《美国药典》34版原料药规定单一杂质不得过0.2%，总杂质量不得过1.0%，3-氨基水杨酸不得过0.2%。《英国药典》2012版中原料药规定单一杂质不得过0.2%，总杂质量不得过1.0%。经过有关物质方法的色谱系统研究，参考原料的质控限度和对本制剂的检测结果，确定美沙拉嗪控释胶囊中有关物质的检测限度为，3-氨基水杨酸不得过0.2%，其他单一杂质不得过0.2%，总杂质量不得过1.0%。
参考文献
[1] 张娟，曹泽伟.清肠愈疡汤联合美沙拉嗪治疗溃疡性结肠炎的疗效分析[J].中国全科医学.2012（01）.
[2] 沈学明.美沙拉嗪及SASP治疗溃疡性结肠炎的临床疗效比较[J].中国现代药物应用.2012（12）.
[关键词]高效液相色谱法；美沙拉嗪；有关物质
中图分类号：P650.3 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）16-0387-01
在慢性疾病中，比较常见的就是溃疡性结肠炎，这种疾病的病变范围比较广，而且病情会呈现出反复发作的现象，而且很可能导致癌变，所以说，这种疾病的危害性极大，得到了医护人员的高度重视。从现如今临床诊疗方面来看，美沙拉嗪药物疗效显著。但是在药物应用的过程中还没有对其内部的相关标准进行规定，也就是说现如今，对于美沙拉嗪药物中的相关成分还没有进行完全的掌握，控制度不够。虽然有些药物研究著作中对原料进行了检测，但是药品的质量问题以及相应的不良反应还没有落实到位。所以，为了用药安全，有必要进行进一步的检测。进而为以后的药物使用提供相应的参考。
1、仪器与试药
在实验之前要对仪器和试药的准备好，其中高效液相色谱仪是必不可少的主要仪器。其中含有检测仪，自动化的进样箱以及色谱工作站等等。主要的试药就是美沙拉嗪控释胶囊，其生产批号和规格都符合国家药品监督总局的规定和要求，可以进行实验。除此之外，还有甲醇溶液，乙腈容易以及辛烷磺酸钠等等，试验中所应用的水分为娃哈哈水。
2、方法与结果
2.1 进行试品、对照品溶液等进行制备
采用细粉状的药品，降入流动相制备成1ml的溶液，其中包含美沙拉嗪0.5mg，将其作为供试品溶液，其精密度要达到实验检测的标准，其中加流动相准确稀释达到500倍，同时将其作为对照溶液。称取适量的氨基水杨酸，将其加入流动相进行溶解，并且支撑1ml的3-氨基水杨酸溶液，容量达到1μg，将其作为对照品溶液。最后要称取一定量的空白辅料，加入流动相制备成空白辅料溶液，在试验中进行对照分析。
2.2 波长选择实验
在实验的过程中，首先称取3-氨基水杨酸溶液置于量瓶中，溶质大约为10mg左右，然后加入适量的流动相进行稀释，观察溶液溶解之后刻度的指数范围。然后去其中的2ml，将其置于量瓶中，同样待其稀释后，摇匀。然后根据照紫外-可见分光光度法来对波长的范围进行控制，为了保证波长范围确定的准确性还需要进行扫描。经过实验的检测可知，波长在297nm处时，吸收率最大，习惯度达到0.219。对于美沙拉嗪药物来说，波长在220nm处时，其吸收率最大，所謂将最终的波长控制在220nm。
2.3 色谱条件和系统适用性试验
在本次试验中主要采用的填充剂是辛烷基硅烷键合硅胶，将柱温控制在30℃的范围内，流动相主要由磷酸盐缓冲液组成，其中包括甲醇和乙腈。其中检测的波长为220nm，采用的进样量为20μl。
取约10mg的美沙拉嗪，将其置于100ml量瓶中，加入流动相溶液进行搅拌稀释。然后取出精密的试样1豪生，放置到100ml的量瓶中，在其中加入3-氨基水杨酸溶液，同时将其搅拌均匀，将得到的溶液作为适用性溶液，为了保证保证实验的准确性，需要将美沙拉嗪峰和3-氨基水杨酸的分离度进行控制。
2.4 专属性实验
2.4.1在实验之前制取的所用溶液中各取20μl，将其诸如液相色谱仪中，根据色谱图的变化情况来做好相关的记录。
2.4.2破坏实验
分别对样品进行酸、碱、氧化、高温、高湿和光照破坏。上述破坏样品，按照2.1项下的配制方法分别加流动相稀释至刻度，作为供试溶液，照上述色谱条件，分别进样20μl测定，按美沙拉嗪保留时间的3倍记录色谱图。结果表明：本品对酸、高温、高湿、光照条件较为稳定，对碱、氧化剂不稳定，尤其对碱破坏更明显。本色谱条件可以检出降解产物，且杂质峰与主峰分离度良好，具有较好的专属性。
2.5 检测限试验
精密称取美沙拉嗪对照品溶液经多次稀释，进样测定，以信噪比为3：1时相应浓度为确定最低检测限。测得美沙拉嗪的最低检出量为16.65ng，进样量20μl。
2.6 定量限试验
精密称取3-氨基水杨酸对照品溶液多次稀释，以信噪比为10：1时相应的浓度为定量限。测得3-氨基水杨酸定量限为86.69ng/ml。另外配制6份最低定量限浓度的溶液进样，所测6份溶液色谱峰保留时间的相对标准差（RSD）为0.16%，峰面积的相对标准差（RSD）为2.66%。
2.7 线性范围
精密称取3-氨基水杨酸杂质对照品适量，加流动相稀释制成每1mL中约含10μg的3-氨基水杨酸溶液，作为对照品溶液贮备液。分别移取贮备液加流动相稀释使成浓度为0.2μg/ml～2.0μg/ml的系列溶液，分别精密量取上述溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图；以3-氨基水杨酸的浓度为横坐标（X），以相对应的峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，结果表明本品在0.1994～1.994μg/ml浓度范围内，线性方程为A=650777.1327C-323.5245，γ=1.000，线性关系良好。
2.8 准确度试验
取3-氨基水杨酸对照品10mg，置100ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液取上述储备液5ml置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为储备液；取3-氨基水杨酸对照品15mg，置100ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密称取样品适量（约相当于美沙拉嗪50mg）3份于100ml量瓶中，加入1ml贮备液，用流动相稀释至刻度；精密称取样品适量（约相当于美沙拉嗪50mg）3份于100ml量瓶中，加入1ml贮备液，用流动相稀释至刻度，摇匀；精密称取样品适量（约相当于美沙拉嗪50mg）3份于100ml量瓶中，加入1ml贮备液，用流动相稀释至刻度，摇匀。取上述样品20μl进样测定；另取3-氨基水杨酸对照品，以外标法计算回收率。结果：平均回收率为96.38%，RSD分别为1.71%。
3、讨论
3.1 检测波长的选择
根据文献，美沙拉嗪及其相关杂质大都在220nm处有最大吸收，并参照《美国药典》、《英国药典》有关物质项下的色谱条件，将检测波长确定为220nm。
3.2 色谱柱的选择
从现行的各国药典中看，美国药典及英国药典原料药均采用C8柱，美国药典采用C8短柱，英国药典采用C8长柱，但实验中发现用C8短柱主峰峰形不甚理想，影响杂质的检测，经试验比较，最终将色谱柱确定为C8长柱。
3.3 色谱条件的选择
《美国药典》34版采用磷酸盐缓冲液-甲醇-乙腈作为流动相，主峰与相邻杂质峰及定量杂质峰均得到很好的分离，《英国药典》采用高氯酸、磷酸水溶液和高氯酸、磷酸乙腈溶液进行梯度洗脱，主峰出峰时间短，与相邻破坏杂质峰未完全分离，达不到理想的分离效果，故采用《美国药典》有关物质色谱条件。
3.4对色谱条件进行耐用性试验，其变动因素：柱温（25℃、30℃、35℃）、流速相对值变化±17%、流动相值变化±0.2pH单位、流动相比例变化±10%及不同厂家的色谱柱。耐用性试验结果表明：所有参数变化结果对测定几乎无影响，所有条件变化均不影响测定结果，方法学验证结果也表明本法专属性强，准确度高，重现性好，是较理想的方法。
3.5《美国药典》34版原料药规定单一杂质不得过0.2%，总杂质量不得过1.0%，3-氨基水杨酸不得过0.2%。《英国药典》2012版中原料药规定单一杂质不得过0.2%，总杂质量不得过1.0%。经过有关物质方法的色谱系统研究，参考原料的质控限度和对本制剂的检测结果，确定美沙拉嗪控释胶囊中有关物质的检测限度为，3-氨基水杨酸不得过0.2%，其他单一杂质不得过0.2%，总杂质量不得过1.0%。
参考文献
[1] 张娟，曹泽伟.清肠愈疡汤联合美沙拉嗪治疗溃疡性结肠炎的疗效分析[J].中国全科医学.2012（01）.
[2] 沈学明.美沙拉嗪及SASP治疗溃疡性结肠炎的临床疗效比较[J].中国现代药物应用.2012（12）.