【摘 要】
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目的 观察新型光敏剂Ru化合物介导的光动力(Ru complex mediated Photodynamic Therapy,Ru-PDT)对5株离体铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的杀伤作用,并初步研究PDT杀
【机 构】
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解放军总医院激光医学科 北京市,100853
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目的 观察新型光敏剂Ru化合物介导的光动力(Ru complex mediated Photodynamic Therapy,Ru-PDT)对5株离体铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的杀伤作用,并初步研究PDT杀菌的作用位点.方法 分离培养两株标准菌株ATCC 27853、PA01(即ATCC 15692)和3株临床耐药菌株,制备成～108 CFU/ml的细菌悬液.实验分为4组:PDT组、单纯光敏剂组、单纯照光组和空白对照组.(1)PDT组:不同浓度Ru光敏剂(终浓度为0.1、0.25、1.0、2.5、10和25 μM)与细菌悬液混合后避光孵育30 min,用457 nm激光照射,照射时间10 min,功率密度为40 mW/cm2.(2)单纯光敏剂组:50 μM光敏剂Ru化合物与细菌悬液避光混合,孵育30 min,不予激光照射.(3)单纯照光组:同浓度细菌悬液与PBS混合后,采用波长457 nm激光照射,照射时间10 min,功率密度为40 mW/cm2.(4)空白对照组:将细菌悬液与PBS混合后,不加入光敏剂,不予激光照射.将各组处理后的细菌悬液收集,10倍递增连续稀释后涂板培养24h进行菌落计数.将PDT处理前后的细菌收集固定,制备超薄切片,通过透射电镜观察PDT作用后菌体的形态学变化.结果 在本实验的光敏剂浓度范围内,PDT对铜绿假单胞菌的杀伤作用呈光敏剂浓度依赖性,以10μM光敏剂Ru,PDT处理5株菌均能达到有效杀菌.单纯照光或光敏剂孵育对细菌存活无影响.电镜观察发现PDT处理组细菌膜结构破坏严重,细菌内容物外溢.结论 Ru-PDT能对多重耐药铜绿假单胞菌有很好的体外杀菌作用;临床耐药菌的膜结构是其产生杀菌作用的重要位点.
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