[目的]探讨兔关节软骨细胞的分离、培养方法,观察单层高浓度培养时细胞表型表达情况。[方法]无菌条件下,从2周龄新西兰白兔的颞颌关节及四肢关节髁突面削取软骨片,采用机械-酶消化法分离软骨细胞,经台盼蓝拒染计数,将细胞按1×106个/孔接种于6孔培养板,传代培养,描绘生长曲线。利用相差显微镜及透射电镜观察细胞形态。应用甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组化对细胞进行鉴定。[结果]每克软骨能获取1.5×106个软骨细胞,活性率为95%。培养2-3 d,细胞贴壁、变形,呈多角形;8 d左右,细胞融合成层。透射电镜观察显示细胞核圆形,有丰富的粗面内质网、高尔基体及分泌的基质成分。甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色阳性。细胞传至5代后,出现“成纤维细胞样”。[结论]本研究建立了简单易行的软骨细胞分离、培养方法;初代、第2代细胞生长良好,适合于实验研究;软骨细胞5代培养后,细胞表型发生改变。