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摘要：目的： 建立高效液相色谱法测定降逆化积口服液中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量。 方法： 色谱柱：Phenomenex C18柱，流动相：乙腈―0.085%磷酸溶液（15：85），流速为1.0mL·min-1，柱温：室温，检测波长：225nm。 结果： 木香烃内酯、去氢木香内酯进样量分别在1.581μg·mL-1～15.81μg·mL-1（r=0.9998），2.25μg·mL-1～22.5μg·mL-1 （r=0.9996），范围内线性关系良好，平均加样回收率（n=9）分别为98.78%、98.81%、。 结论： 建立了HPLC测定木香烃内酯、去氢木香内酯的含量，提供了更好的控制该药质量的方法。
关键词： 高效液相色谱法 ；降逆化积口服液；木香烃内酯
【中图分类号】R286 【文献标识码】A
【文章编号】1002-3763（2014）04-0013-02
Simultaneous Determination of the Contents of Costunolide and Dehydrocostuslactone in JiangNiHuaJi Oral liquid by HPLC
Abstract： Objective ： To establish an HPLC method for the Simultaneous determination of the Contents of Costunolide and Dehydrocostuslactone in JiangNiHuaJi Oral liquid Methods The column C18 was used with CAN-0.085%H3PO4 mobile phase， the flow rate was 1.0ml.min-1， the column temperature was Room Temperature and the detection wavelength was at 225 nm. Results The calibration curves were linear within the range of 1.581μg·mL-1～15.81μg·mL-1（r=0.9998）fo Costunolide ； 2.25μg·mL-1～22.5μg·mL-1 （r=0.9996）for Dehydrocostuslactone； The average recovery（n=9）of the three components in JiangNiHuaJi Oral liquid were98.78% and 98.81% .Conclusion The mothod is specific， accurate and reproducible， and it can be used for the quality control.
Key words： HPLC； JiangNiHuaJi Oral liquid； Costunolide
降逆化积口服液是由木香、枳壳、槟榔、陈皮等七味药材制成的中药制剂。具有顺气降逆，消积止痛的功效。主用于中老年气滞、食积证、症见脘腹胀满、腹痛、便秘及手术后腹胀等症。原有质量标准为《医院自制制剂注册质量标准》，无主药木香的含量测定，本实验参照中国药典2010年版一部[1]采用高效液相色谱法同时测定处方君药木香中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量，样品不需要特殊处理，具有简便、准确、无干扰的特点。
1 仪器与试药
日本岛津LC-20ATVP高效液相色谱仪；CBL9960A超声波清洗器。对照品：木香烃内酯（批号：111524-200503）、去氢木香内酯（批号：111525-200505），降逆化积口服液（批号：130220，130511，130925，140218）；乙腈、磷酸为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：
色谱柱：Phenomenex C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈―0.085%磷酸溶液（15：85）；流速：1.0mL·min-1；柱温：室温；检测波长：225nm；进样量：10μL。按木香烃内酯、去氢木香内酯计算，理论板数均不低于2000[2]。
2.2 对照品溶液制备：
精密称取经减压干燥（真空度0.075MPa，温度20℃，干燥剂五氧化二磷）24h的木香烃内酯15.81mg，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成木香烃内酯质量浓度为158.1μg·mL-1对照品溶液①；另精密称取经减压干燥（真空度0.075MPa，温度20℃，干燥剂五氧化二磷）24h的去氢木香内酯对照品11.25mg，置50mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成去氢木香内酯质量浓度为225.0μg·mL-1混合对照品溶液②[3]。分别精密量取上述对照品溶液①②各5ml，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成木香烃内酯质量浓度为15.81μg·mL-1 ，去氢木香内酯质量浓度为22.5μg·mL-1对照品混合溶液③。
2.3 供试品溶液制备：
精密量取本品5ml，置25mL容量瓶中，加甲醇适量，分2次超声处理（功率250W，频率33kHz），每次时间为20min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得[4]。
2.4 阴性对照溶液的制备：
取缺木香的阴性制剂适量（约相当于供试品的量），按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。
2.5 线性关系考察：
精密吸取上述对照品混合溶液③1.0、2.0、4.0、6.0、8.0，10.0mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，各取 10μL分别注入液相色谱仪测定，记录峰面积，以峰面积为纵座标，以进样量为横座标，绘制标准曲线。结果见表1。 2.6 精密度试验：
按2.1项下的色谱条件，用同一供试品溶液连续进样6次，每次10μL，分别测得各次峰面积。结果木香烃内酯、去氢木香内酯RSD值分别为0.84%，0.80%。
2.7 稳定性试验：
取同一对照品混合溶液在0，2，4，8，10，12，15， 18， 24h分别进样10μL，结果6次进样木香烃内酯峰面积的RSD为0.90%；去氢木香内酯峰面积的RSD为0.83%，结果表明供试品溶液在24h内是稳定的。
2.8 阴性对照实验：
取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL，按2.1项下的色谱条件分别进样测定，记录色谱图。结果显示，阴性对照溶液对测定结果无干扰。见图1C。
2.9 重复性试验：
取同一批样品（批号：130925），按2.3项下的供试品溶液制备方法，平行制备6份，依法测定，木香烃内酯含量均值为28.2μg·ml-1，RSD=0.84%；去氢木香内酯含量均值为47.8μg·ml-1，RSD=0.93%，结果表明该方法的重复性好。
2.10 回收试验：
取本品（批号：130925，含量：木香烃内酯28.2μg·ml-1；去氢木香内酯47.8μg·ml-1）5ml，共9份，置25mL容量瓶中，分别精密加入浓度为158.1μg·mL-1的木香烃内酯对照品溶液①、225.0μg·mL-1去氢木香内酯对照品溶液②0.8，0.8，0.8，1.0，1.0，1.0，1.2，1.2，1.2mL，加入甲醇适量，分两次超声处理，每次20min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取滤液按2.1项下的色谱条件进行含量测定并计算回收率。结果见表2。
2.11 样品的测定：
取4批样品，按2.3项下的供试品溶液制备方法制备，精密吸取10μL，注入液相色谱仪测定，以外标法计算样品中木香烃内酯、去氢木香内酯的含量（见表3）。
表3 样品含量测定结果表（mg·片-1，n=3）
3 讨论
流动相的优化 在研究试验过程中以甲醇—水（25：75）为流动相系统时，发现色谱峰出峰时间长，柱效低，分离效果差且色谱峰拖尾，改用乙腈—0.085%磷酸溶液（15：85）系统时出峰时间适中，色谱峰较尖锐，上述问题得到改善，柱效及分离度均达到要求。
本试验建立的测定含量的方法可有效控制降逆化积口服液的产品质量，具有简便、灵敏、准确且专属性较强的优点，对制剂质量进行更好的控制，具一定的实际意义。
参考文献：
[1]中国药典2005年版.（一部）[S] 2005：附录57.
[2]中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范[M]. 北京：中国医药科技出版社， 2005： 79-95.
[3]刘晓哲.多波长RP-HPLC法同法测定肥儿丸中木香烃内酯、去氢木香内酯、去氢二异丁香酚的含量[J].中成药，2014， 36（1） ： 98-102
[4]包桂花，包同力噶.高效液相色谱法测定蒙药壮西六味散中中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量[J].中国医院药学杂志，2013，33（22）：1900-1903.
关键词： 高效液相色谱法 ；降逆化积口服液；木香烃内酯
【中图分类号】R286 【文献标识码】A
【文章编号】1002-3763（2014）04-0013-02
Simultaneous Determination of the Contents of Costunolide and Dehydrocostuslactone in JiangNiHuaJi Oral liquid by HPLC
Abstract： Objective ： To establish an HPLC method for the Simultaneous determination of the Contents of Costunolide and Dehydrocostuslactone in JiangNiHuaJi Oral liquid Methods The column C18 was used with CAN-0.085%H3PO4 mobile phase， the flow rate was 1.0ml.min-1， the column temperature was Room Temperature and the detection wavelength was at 225 nm. Results The calibration curves were linear within the range of 1.581μg·mL-1～15.81μg·mL-1（r=0.9998）fo Costunolide ； 2.25μg·mL-1～22.5μg·mL-1 （r=0.9996）for Dehydrocostuslactone； The average recovery（n=9）of the three components in JiangNiHuaJi Oral liquid were98.78% and 98.81% .Conclusion The mothod is specific， accurate and reproducible， and it can be used for the quality control.
Key words： HPLC； JiangNiHuaJi Oral liquid； Costunolide
降逆化积口服液是由木香、枳壳、槟榔、陈皮等七味药材制成的中药制剂。具有顺气降逆，消积止痛的功效。主用于中老年气滞、食积证、症见脘腹胀满、腹痛、便秘及手术后腹胀等症。原有质量标准为《医院自制制剂注册质量标准》，无主药木香的含量测定，本实验参照中国药典2010年版一部[1]采用高效液相色谱法同时测定处方君药木香中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量，样品不需要特殊处理，具有简便、准确、无干扰的特点。
1 仪器与试药
日本岛津LC-20ATVP高效液相色谱仪；CBL9960A超声波清洗器。对照品：木香烃内酯（批号：111524-200503）、去氢木香内酯（批号：111525-200505），降逆化积口服液（批号：130220，130511，130925，140218）；乙腈、磷酸为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：
色谱柱：Phenomenex C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈―0.085%磷酸溶液（15：85）；流速：1.0mL·min-1；柱温：室温；检测波长：225nm；进样量：10μL。按木香烃内酯、去氢木香内酯计算，理论板数均不低于2000[2]。
2.2 对照品溶液制备：
精密称取经减压干燥（真空度0.075MPa，温度20℃，干燥剂五氧化二磷）24h的木香烃内酯15.81mg，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成木香烃内酯质量浓度为158.1μg·mL-1对照品溶液①；另精密称取经减压干燥（真空度0.075MPa，温度20℃，干燥剂五氧化二磷）24h的去氢木香内酯对照品11.25mg，置50mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成去氢木香内酯质量浓度为225.0μg·mL-1混合对照品溶液②[3]。分别精密量取上述对照品溶液①②各5ml，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成木香烃内酯质量浓度为15.81μg·mL-1 ，去氢木香内酯质量浓度为22.5μg·mL-1对照品混合溶液③。
2.3 供试品溶液制备：
精密量取本品5ml，置25mL容量瓶中，加甲醇适量，分2次超声处理（功率250W，频率33kHz），每次时间为20min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得[4]。
2.4 阴性对照溶液的制备：
取缺木香的阴性制剂适量（约相当于供试品的量），按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。
2.5 线性关系考察：
精密吸取上述对照品混合溶液③1.0、2.0、4.0、6.0、8.0，10.0mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，各取 10μL分别注入液相色谱仪测定，记录峰面积，以峰面积为纵座标，以进样量为横座标，绘制标准曲线。结果见表1。 2.6 精密度试验：
按2.1项下的色谱条件，用同一供试品溶液连续进样6次，每次10μL，分别测得各次峰面积。结果木香烃内酯、去氢木香内酯RSD值分别为0.84%，0.80%。
2.7 稳定性试验：
取同一对照品混合溶液在0，2，4，8，10，12，15， 18， 24h分别进样10μL，结果6次进样木香烃内酯峰面积的RSD为0.90%；去氢木香内酯峰面积的RSD为0.83%，结果表明供试品溶液在24h内是稳定的。
2.8 阴性对照实验：
取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL，按2.1项下的色谱条件分别进样测定，记录色谱图。结果显示，阴性对照溶液对测定结果无干扰。见图1C。
2.9 重复性试验：
取同一批样品（批号：130925），按2.3项下的供试品溶液制备方法，平行制备6份，依法测定，木香烃内酯含量均值为28.2μg·ml-1，RSD=0.84%；去氢木香内酯含量均值为47.8μg·ml-1，RSD=0.93%，结果表明该方法的重复性好。
2.10 回收试验：
取本品（批号：130925，含量：木香烃内酯28.2μg·ml-1；去氢木香内酯47.8μg·ml-1）5ml，共9份，置25mL容量瓶中，分别精密加入浓度为158.1μg·mL-1的木香烃内酯对照品溶液①、225.0μg·mL-1去氢木香内酯对照品溶液②0.8，0.8，0.8，1.0，1.0，1.0，1.2，1.2，1.2mL，加入甲醇适量，分两次超声处理，每次20min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取滤液按2.1项下的色谱条件进行含量测定并计算回收率。结果见表2。
2.11 样品的测定：
取4批样品，按2.3项下的供试品溶液制备方法制备，精密吸取10μL，注入液相色谱仪测定，以外标法计算样品中木香烃内酯、去氢木香内酯的含量（见表3）。
表3 样品含量测定结果表（mg·片-1，n=3）
3 讨论
流动相的优化 在研究试验过程中以甲醇—水（25：75）为流动相系统时，发现色谱峰出峰时间长，柱效低，分离效果差且色谱峰拖尾，改用乙腈—0.085%磷酸溶液（15：85）系统时出峰时间适中，色谱峰较尖锐，上述问题得到改善，柱效及分离度均达到要求。
本试验建立的测定含量的方法可有效控制降逆化积口服液的产品质量，具有简便、灵敏、准确且专属性较强的优点，对制剂质量进行更好的控制，具一定的实际意义。
参考文献：
[1]中国药典2005年版.（一部）[S] 2005：附录57.
[2]中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范[M]. 北京：中国医药科技出版社， 2005： 79-95.
[3]刘晓哲.多波长RP-HPLC法同法测定肥儿丸中木香烃内酯、去氢木香内酯、去氢二异丁香酚的含量[J].中成药，2014， 36（1） ： 98-102
[4]包桂花，包同力噶.高效液相色谱法测定蒙药壮西六味散中中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量[J].中国医院药学杂志，2013，33（22）：1900-1903.