【摘 要】
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目的:应用ITS2序列差异对铁皮石斛(De ndrob iumofficinale)和类似石斛品种进行归类分析,并建立快速分析鉴别特定铁皮石斛的方法.方法:提取9批石斛药材品种的DNA,采用ITS2通
【机 构】
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无限极(中国)有限公司,广东 广州,510663
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目的:应用ITS2序列差异对铁皮石斛(De ndrob iumofficinale)和类似石斛品种进行归类分析,并建立快速分析鉴别特定铁皮石斛的方法.方法:提取9批石斛药材品种的DNA,采用ITS2通用引物进行PCR扩展,测序.对ITS2序列进行BLAST序列比对,BioEdit软件进行ClustalW多重对比,针对差异序列设计特异引物,PCR扩增,通过琼脂糖电泳进行铁皮石斛特定品种的鉴别.结果:碱基序列配对BLAST未能将#1～4样品准确归类,#5～9确定为铁皮石斛(Dendrobiumofficinale).9批样品进行ITS2序列多重对比,发现#1～4样品与#5～9样品的ITS2序列在23～49 bp位置存在显著差异,采用软件设计引物ITS2-specific R和ITS2-specific F,在退火温度为60℃PCR扩增,#5～9样品在136 bp出现条带,而#1～4在相应位置样品未见条带.结论:特定铁皮石斛品种的ITS2序列与伪品存在局部差异,能够通过PCR方法与伪品进行区分.该PCR鉴别方法将为区分特定铁皮石斛和伪品提供快速、有效的鉴别方法.
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