优化反向PCR法分离转基因油菜外源T-DNA侧翼序列的研究(英文)

来源 :Agricultural Science & Technology | 被引量 : 0次 | 上传用户：slcsg956

【摘要】

：

[目的]优化反向PCR(IPCR)条件分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。[方法]以单拷贝的转基因油菜FS4为研究材料,用SDS法和改良CTAB法(包括低温操作、增加酚氯仿的抽提次数以及

【作者】

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杨坤吴学龙朗春秀陈锦清

【机构】

：

浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所,浙江省植物基因工程代谢重点实验室,浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江省植物基因工程代谢重点实验室

【出处】

：

Agricultural Science & Technology

【发表日期】

：

2010年2期

【关键词】

：

反向PCR 侧翼序列改良CTAB法转基因油菜 Inverse PCR（IPCR） Flanking sequences Improved CTAB me

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[目的]优化反向PCR(IPCR)条件分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。[方法]以单拷贝的转基因油菜FS4为研究材料,用SDS法和改良CTAB法(包括低温操作、增加酚氯仿的抽提次数以及延长低温沉淀时间等)提取转基因油菜总DNA,并进行酶切、纯化、自连接,再使用普通聚合酶与热启动高保真的ExTaqHS聚合酶进行两轮巢式PCR扩增,进行序列对比。油菜数据库比对搜索采用BBSRCBrassicaDB上WU-BLAST2.0工具,拟南芥数据库比对分析采用TAIR数据库中WU-BLAST2.0工具。为验证FS

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