【摘 要】
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目的观察转谷氨酰胺酶1基因(TGM1)表达沉默前、后对角质形成细胞的细胞周期及细胞周期相关蛋白表达的影响，探讨其机制。方法利用流式细胞仪(FCM)检测RNA干扰(RNAi)技术沉默TGM1基因表达前、后人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)的细胞周期状况；应用免疫细胞化学SP法和Western印迹法检测RNAi技术沉默TGM1基因表达前、后细胞周期蛋白(cyclin)D1、cyclin B1、细胞
【机 构】
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目的观察转谷氨酰胺酶1基因(TGM1)表达沉默前、后对角质形成细胞的细胞周期及细胞周期相关蛋白表达的影响，探讨其机制。
方法利用流式细胞仪(FCM)检测RNA干扰(RNAi)技术沉默TGM1基因表达前、后人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)的细胞周期状况；应用免疫细胞化学SP法和Western印迹法检测RNAi技术沉默TGM1基因表达前、后细胞周期蛋白(cyclin)D1、cyclin B1、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)的表达差异。
结果TGM1基因沉默后，小干扰RNA(siRNA)-TGM1转染组处于G0/G1期的细胞数(78.27%±1.83%)明显高于阴性对照组(56.84%±2.72%，P<0.05)和空白对照组(57.19%±3.72%，P<0.05)；而S期和G2/M期的细胞数，siRNA-TGM1转染组(32.78%±5.48%、3.66%±0.30%)明显低于阴性对照组(57.32%±2.91%、9.39%±0.68%，均P<0.05)和空白对照组(55.71%±2.84%、9.77%±0.52%，均P<0.05)。免疫细胞化学检测结果显示，TGM1基因沉默后cyclinD1、cyclin B1、CDK4呈阴性表达；Western印迹法检测结果显示，TGM1沉默后cyclin D1、cyclin B1、CDK4的蛋白条带亮度明显降低。
结论TGM1基因沉默后能阻断HaCaT细胞的细胞周期，使细胞周期停留在S期，不能进入G2/M期，无法完成DNA的合成，未完成细胞的分裂；TGM1基因沉默可能通过抑制细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin B1、CDK4的表达影响表皮细胞的细胞周期。
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