人泛素偶联酶UBE2C/UbcH10基因的克隆、原核表达载体的构建及表达

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【摘要】

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目的获取泛素偶联酶家族成员之一的UBE2C／UbcH10的基因，构建具有His标签的原核表达载体，在大肠杆菌中表达UBE2C／UbcH10蛋白。方法利用RT—PCR的方法从肝癌细胞HepG2中获得UbcH10

【作者】

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杜红延马奎黄湘王穗海李明

【机构】

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南方医科大学生物技术学院抗体工程研究所

【出处】

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广东医学

【发表日期】

：

2009年5期

【关键词】

：

泛素偶联酶原核表达载体构建表达

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目的获取泛素偶联酶家族成员之一的UBE2C／UbcH10的基因，构建具有His标签的原核表达载体，在大肠杆菌中表达UBE2C／UbcH10蛋白。方法利用RT—PCR的方法从肝癌细胞HepG2中获得UbcH10的基因，克隆到pMD-19T载体中并测序鉴定，酶切回收后插入原核表达载体pET32a（＋）中，构建重组表达载体pET32a—UbcH10，转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导表达。结果重组表达载体pET32a—UbcH10在大肠杆菌BL21中经IFFG诱导4h获得稳定高效的融合表达。重组蛋白以可溶形式

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