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摘 要：本研究旨在利用细胞中和实验方法测定单克隆抗体是否具有中和病毒的活性。利用细胞中和法测定两株包被（捕获）单克隆抗体3D7（含O/Mya98/XJ/2010株抗体）和7G3（含O/GX/09-7株抗体）对不同病毒的中和抗体值，验证这两株单抗是否具有中和病毒的活性。结果表明：7G3可以中和O/GX/09-7株病毒，但不能中和其他毒株病毒，虽然中和能力不强，但是特异性中和，进一步验证该抗体仅与O/GX/09-7株反应；3D7仅与缅甸98株发生特异性结合反应，与其他毒株均不产生反应，而且中和效价达1∶128，属于具有中和能力的单抗抗体。
关键词：单克隆抗体；细胞中和实验；特异性
中图分类号：S815 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2017）03-0056-02
口蹄疫（Foot-and-Mouth Disease，FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus，FMDV）引起的偶蹄兽的一种急性、热性、高度接触性传染病[1]。该病感染途径多、传播速度快，严重危害畜牧业的发展和国际经济贸易的流通，被世界动物卫生组织（OIE）列为A类疾病，该病为必须上报的疾病。我国也将其列为一类传染病，并列为国家强制性免疫的动物疫病之一[2]。根据口蹄疫血清型不同，口蹄疫病毒分为O、A、C、SATⅠ、SATⅡ、SATⅢ、AsiaⅠ七个型血清型[3]，且各个血清型间没有交叉保护力，每个血清型又有很多亚型，型内不同毒株间的变异可导致抗原差异，这为口蹄疫的诊断和预防带来了极大的困难[4]。
目前FMDV单克隆抗体主要应用于FMDV抗原位点的分析与定位、FMDV受体结合位点的研究、FMDV抗原结构与生物学功能相关性研究、鉴定并跟踪病毒株抗原变异等方面，同时，FMDV单抗还可以根据流行毒株的中和单抗谱，从疫苗毒株中选择出相近毒株，应用于免疫预防中。针对疫苗株的单克隆抗体，也可用于对疫苗质量进行评估。
1 材料
1.1 病毒
中和用毒为O/GX/09-7、O/JMS、O/MYA98/BY/2010、O/OZK-93、O/Mya98/XJ/10-11、Re-A/WH/09和Asia1/JSL 7株细胞毒，由金宇保灵生物药品有限公司提供。
1.2 单抗
3D7（含O/MYA98/BY/2010株抗体）和7G3（含O/GX/09-7株抗体）抗体，由金宇保灵生物药品有限公司提供。
1.3 主要试剂
BHK-21细胞营养液、维持液，由工程实验室病毒室提供。
2 方法
2.1 单抗的稀释
在96孔细胞培养板上分别加入单抗，用无血清细胞维持液稀释单抗，从1∶5开始作一系列倍比稀释，每孔含量50 μL，每个稀释度做4个复孔。
2.2 稀释病毒
取-70 ℃冰箱保存的病毒液，按照测定的毒价作200 TCID50稀释（与等量单抗混合后，其毒价为100 TCID50）。
2.3 感作
每孔加入50 μL已稀释好的病毒液，置5% CO2 37 ℃恒温培养箱，中和1 h。
2.4 加入细胞悬液
单抗与病毒中和1 h后，取出，每孔加入50 μL细胞悬液，置于5%CO2 37 ℃恒温培养箱中继续培养。每隔24 h观察一次并记录结果。
2.5 病毒回归实验
先将病毒作0.1、1、10、100 TCID50稀释，每个稀释度做4个复孔，每孔含量100 μL。然后每孔加入100 μL细胞悬液，置5%CO237 ℃恒温培养箱培养。判定结果时0.1 TCID50应无病变，1 TCID50应有1～3孔病变，100 TCID50全都病变，表明实验成立，否则需要重做。
2.6 正常细胞对照
为避免培养板本身引起实验误差，应在每块实验板上均设立4孔不接种病毒和单抗的的正常细胞对照，该对照應在整个实验中一直保持良好的形态。
2.7 结果判定和计算
当病毒回归实验、正常细胞对照全部成立时，才能进行判定。被检单抗孔出现100%病变判为阴性，50%以上细胞出现保护者为阳性；固定病毒稀释单抗中和实验的结果计算，以单抗/病毒混合物的50%终点表示单抗的最终稀释度，按Karber法计算50%单抗中和滴度。
3 实验结果
实验结果见表1。
4 结论
实验结果表明，7G3仅中和O/GX/09-7株细胞毒，而不中和其他毒株；3D7仅中和缅甸98株，而不能中和其他毒株。结果表明2株建立ELISA方法的关键抗体捕获抗体，一株3D7是强中和性单克隆抗体，一株7G3为弱中和性单克隆抗体，但进一步验证了2株抗体均有很强的特异性。
参考文献：（2篇，略）
关键词：单克隆抗体；细胞中和实验；特异性
中图分类号：S815 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2017）03-0056-02
口蹄疫（Foot-and-Mouth Disease，FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus，FMDV）引起的偶蹄兽的一种急性、热性、高度接触性传染病[1]。该病感染途径多、传播速度快，严重危害畜牧业的发展和国际经济贸易的流通，被世界动物卫生组织（OIE）列为A类疾病，该病为必须上报的疾病。我国也将其列为一类传染病，并列为国家强制性免疫的动物疫病之一[2]。根据口蹄疫血清型不同，口蹄疫病毒分为O、A、C、SATⅠ、SATⅡ、SATⅢ、AsiaⅠ七个型血清型[3]，且各个血清型间没有交叉保护力，每个血清型又有很多亚型，型内不同毒株间的变异可导致抗原差异，这为口蹄疫的诊断和预防带来了极大的困难[4]。
目前FMDV单克隆抗体主要应用于FMDV抗原位点的分析与定位、FMDV受体结合位点的研究、FMDV抗原结构与生物学功能相关性研究、鉴定并跟踪病毒株抗原变异等方面，同时，FMDV单抗还可以根据流行毒株的中和单抗谱，从疫苗毒株中选择出相近毒株，应用于免疫预防中。针对疫苗株的单克隆抗体，也可用于对疫苗质量进行评估。
1 材料
1.1 病毒
中和用毒为O/GX/09-7、O/JMS、O/MYA98/BY/2010、O/OZK-93、O/Mya98/XJ/10-11、Re-A/WH/09和Asia1/JSL 7株细胞毒，由金宇保灵生物药品有限公司提供。
1.2 单抗
3D7（含O/MYA98/BY/2010株抗体）和7G3（含O/GX/09-7株抗体）抗体，由金宇保灵生物药品有限公司提供。
1.3 主要试剂
BHK-21细胞营养液、维持液，由工程实验室病毒室提供。
2 方法
2.1 单抗的稀释
在96孔细胞培养板上分别加入单抗，用无血清细胞维持液稀释单抗，从1∶5开始作一系列倍比稀释，每孔含量50 μL，每个稀释度做4个复孔。
2.2 稀释病毒
取-70 ℃冰箱保存的病毒液，按照测定的毒价作200 TCID50稀释（与等量单抗混合后，其毒价为100 TCID50）。
2.3 感作
每孔加入50 μL已稀释好的病毒液，置5% CO2 37 ℃恒温培养箱，中和1 h。
2.4 加入细胞悬液
单抗与病毒中和1 h后，取出，每孔加入50 μL细胞悬液，置于5%CO2 37 ℃恒温培养箱中继续培养。每隔24 h观察一次并记录结果。
2.5 病毒回归实验
先将病毒作0.1、1、10、100 TCID50稀释，每个稀释度做4个复孔，每孔含量100 μL。然后每孔加入100 μL细胞悬液，置5%CO237 ℃恒温培养箱培养。判定结果时0.1 TCID50应无病变，1 TCID50应有1～3孔病变，100 TCID50全都病变，表明实验成立，否则需要重做。
2.6 正常细胞对照
为避免培养板本身引起实验误差，应在每块实验板上均设立4孔不接种病毒和单抗的的正常细胞对照，该对照應在整个实验中一直保持良好的形态。
2.7 结果判定和计算
当病毒回归实验、正常细胞对照全部成立时，才能进行判定。被检单抗孔出现100%病变判为阴性，50%以上细胞出现保护者为阳性；固定病毒稀释单抗中和实验的结果计算，以单抗/病毒混合物的50%终点表示单抗的最终稀释度，按Karber法计算50%单抗中和滴度。
3 实验结果
实验结果见表1。
4 结论
实验结果表明，7G3仅中和O/GX/09-7株细胞毒，而不中和其他毒株；3D7仅中和缅甸98株，而不能中和其他毒株。结果表明2株建立ELISA方法的关键抗体捕获抗体，一株3D7是强中和性单克隆抗体，一株7G3为弱中和性单克隆抗体，但进一步验证了2株抗体均有很强的特异性。
参考文献：（2篇，略）