槲皮素诱导的HO-1对离体星形胶质细胞缺氧缺糖损伤保护作用的研究

来源 :中国实用神经疾病杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenyanqing
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目的观察槲皮素(quercetin,QUE)诱导的血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)对离体星形胶质细胞(astrocytes,AS)缺氧缺糖(oxygen/glucose deprivation,OGD)损伤的保护作用。方法 (1)新生24h内的Sprague-Dawley(SD)大鼠,取其新鲜大脑皮质组织,体外培养并纯化获得纯度达90%以上的AS,采用神经胶质纤维酸性蛋白(glia fibrillary acid protein,GFAP)免疫荧光技术鉴定AS。(2)应用2mmol/L连二亚硫酸钠(Na2S2O4)联合无糖培养基建立细胞OGD模型,将AS分为Control组、OGD组、OGD+QUE组,QUE终浓度分别为1μmol/L、3μmol/L、10μmol/L和30μmol/L,培养6h后CCK-8法检测细胞相对存活率,使用相应试剂盒检测各组LDH漏出量、MDA和SOD水平。(3)Western blotting法检测10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L的QUE共孵育正常培养的AS 8h后对HO-1蛋白表达水平的影响,并观察10μmol/L QUE共孵育正常培养的AS 3h、6h和12h后对其表达水平的影响。结果 (1)细胞免疫荧光鉴定显示大多数细胞为GFAP阳性其纯度达95%以上。(2)10μmol/L和30μmol/L的QUE共孵育能显著提高OGD损伤后AS的相对存活率,并能显著降低OGD损伤后AS的LDH漏出量、MDA水平,提高SOD水平,与OGD组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)与Control组相比,10μmol/L QUE孵育正常培养的AS 8h后较25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L的QUE显著提高了HO-1蛋白的表达水平(P<0.01);10μmol/L QUE共孵育AS 6h和12h后较Control组HO-1蛋白表达水平显著升高(P<0.01),以6h组为著。结论 10~30μmol/L QUE可保护Na2S2O4联合无糖培养基对AS的OGD损伤;QUE对AS OGD损伤的保护作用与其能诱导AS高表达HO-1蛋白有关。
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