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目的：应用反相高效液相色谱（RP-HPLC）技术，建立定量检测兔房水万古霉素的方法。方法：房水样品中加入适量10％硫酸锌．高速离心．蛋白质沉淀后进行RP—HPLC检测。检测条件：分析柱为C8柱；流动相为甲醇（A）-醋酸（B），梯度洗脱。兔眼结膜囊内滴入纳米一万古霉素滴眼液后于120min收集房水样本检测万古霉素浓度。结果：房水中药物峰与杂质峰分离良好，在0．5～20．0ug/ml范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系。1、10、18ug／ml 3种浓度的平均回收率为（98．670±0．321）％，