【摘 要】
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目的构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(ureB)基因与大肠杆菌K-12株hlyE基因融合表达的原核表达质粒pTrc99A-hlyE.并表达.方法用PCR扩增hlyE基因,经
【机 构】
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中山大学第一附属医院消化内科,广州,510080
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目的构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(ureB)基因与大肠杆菌K-12株hlyE基因融合表达的原核表达质粒pTrc99A-hlyE.并表达.方法用PCR扩增hlyE基因,经酶切连接反应将其克隆入重组原核表达质粒并测序,与GenBank中的核酸和蛋白序列进行BLAST分析,重组的阳性克隆经IPTG诱导培养,SE-PAGE电泳进行表达分析,薄层扫描分析融合蛋白的含量.结果对重组质粒进行酶切和PCR检测,证明构建了携带hlyE及ureB基因的重组原核表达质粒pTrc99A-ureB/hlyE,核酸序列测定及同源性分析证实所构建的原核表达质粒pTrc99A-ureB/hlyE中所含的Hp-ureB及hlyE与GeneBank中的Hp-ureB和hlyE序列的同源性分别为97.42%(1663/1707)、99%(910/918).重组细菌JM109可表达约100kD的融合蛋白ureB/hlyE,含量占全菌体蛋白含量的15.5%.结论构建并鉴定了原核表达质粒pTrc99A-hlyE并高效表达,为研究Hp口服疫苗奠定了基础.
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