目的 探讨基因修饰毛囊干细胞(hair follicle stem cells,HFSCs)复合明胶(gelatin,Gel)-硫酸软骨素(chondroitin sulfate,C6S)-透明质酸(hyaluronic acid,HA)三维支架对组织工程皮肤血管化的影响. 方法 采用冷冻-冻干法制备Gel-C6S-HA三维支架,接种VEGF165基因修饰的HFSCs,电镜观察复合支架内细胞形态、贴壁情况;取18只SD大鼠,每只背部正中线旁开两侧各做2个1.2cm×1.2 cm全层皮肤缺损创面.按随机数字表法分为A组(VEGF165转染HFSCs/Gel-C6S-HA支架)、B组(空载体转染HFSCs/Gel-C6S-HA支架)、C组(Gel-C6S-HA支架)和D组(凡士林纱布).将A、B、C组材料植入创面,D组用无菌敷料覆盖.术后7,14,21 d观察创面愈合情况;采集标本行HE染色;CD31、α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)免疫组化检测,微血管密度(microvessel density,MVD)计数,评价新生血管形成情况. 结果 电镜下支架形成海绵状三维结构,孑孔间存在交通孑孔相连,呈圆形或多边形,孔径(133.2±43.4) μm.复合支架培养7d后,电镜下可见细胞完全铺展开,贴壁牢固.形态学观察术后7d,四组创面无明显红肿反应,术后14,21 d,A组创面愈合速度明显高于其他组,其移植物吸收速度快.组织学和免疫学检测结果表明,术后7d,A、B组移植物内均有微血管生成,支架三维结构形态蓬松,细胞分布均匀,C组支架轮廓清晰,与皮下组织结合处少量细胞聚集;术后14,21 d,A组形成的新生血管最多且大,A、B组支架内充满细胞并有部分向表皮层聚集,支架材料均有不同程度的吸收,C组有皮下组织细胞向支架内迁移.术后各时相点,A组MVD明显高于B、C组(P＜0.05). 结论 VEGF165基因修饰HFSCs复合Gel-C6S-HA支架构建的皮肤替代物可促进创面愈合过程中的血管新生,是一种很有应用前景的组织工程皮肤替代物。