猪链球菌2型PCR-ELISA检测方法的建立与优化

来源 :福建农业学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：kxl_cqmu

【摘要】

：

根据已发表的猪链球菌2型的cps2j基因序列,设计合成上游标记生物素的1对引物和1条标记地高辛的特异性探针,建立了该菌的PCR-ELISA检测方法。方法利用PCR仪作为杂交场所,并对

【作者】

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方勤美朱继昌池洪树林天龙

【机构】

：

福建省农业科学院生物技术研究所,福建农林大学动物科学院

【出处】

：

福建农业学报

【发表日期】

：

2012年12期

【关键词】

：

猪链球菌2型、PCR-ELISA cps2j基因

【基金项目】

：

福建省科技计划项目(2006NZ0003-2、2006F3024)

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根据已发表的猪链球菌2型的cps2j基因序列,设计合成上游标记生物素的1对引物和1条标记地高辛的特异性探针,建立了该菌的PCR-ELISA检测方法。方法利用PCR仪作为杂交场所,并对几个主要条件参数进行优化,结果显示在鲑鱼精DNA浓度1.6mg·mL-1、变性温度为94℃、变性时间为1min、探针浓度为0.5umol·mL-1、杂交温度55℃、杂交时间1min、一抗作用时间45min、二抗作用时间40min时检测方法敏感性最好,特异性最强。通过对17个阴性样本检测,测得平均值为0.05

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