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【摘 要】 目的：观察抗氧化贴剂对UV照射造成的皮肤损伤的修复作用。方法：建立家兔UV照射皮肤损伤模型，治疗组于UV照射后分别敷贴抗氧化贴剂不同的时间，连续辐照、敷贴30d，观察皮肤变化情况，检测皮肤中SOD、CAT和MDA的含量。结果：治疗组红斑、水肿、出血、渗出症状较模型组出现得晚，且症状轻，治疗组与模型组比较，症状评分均有明显改善（P<0.01）。治疗组与模型组比较，SOD和CAT含量明显升高， MDA含量明显降低（P<0.01）。结论：抗氧化凝胶贴剂对UV照射造成的皮肤有一定的修复作用。
【关键词】 抗氧化贴剂;紫外线;皮肤损伤
Abstract：Objective To observe the repairing effect of Antioxidant Patch on skin damage caused by UV irradiation.Methods The model of rabbit skin injury induced by UV irradiation was established.The treatment group was treated with Antioxidant Patch for 30 days after UV irradiation.The changes of skin were observed and the contents of SOD，CAT and MDA in the skin were detected.Results The symptoms of erythema，edema，bleeding and exudation in the treatment group appeared later than that in the model group，and the symptoms were mild.The symptom scores of the treatment group and the model group were significantly improved，P<0.01.Compared with the model group，the content of SOD and CAT in the treatment group was significantly increased，while the content of MDA was significantly decreased （P< 0.01）.Conclusion The Antioxidant Patch has certain repair effect on the skin damage caused by UV irradiation.
Keywords：Antioxidant Patch;UV;Skin Damage
紫外線（Ultravioletray，UV）在自然界中无处不在，其对皮肤的损伤已有大量的研究。皮肤长期受紫外线照射，会造成积累性的损伤，表现为皮肤变黑、色斑、皮肤松弛、皱纹加深;严重的导致局部红肿、出血、炎症反应等。其作用机制之一是紫外线使人体皮肤中活性氧自由基含量急剧升高，进而会破坏正常组织细胞的大分子物质代谢，导致蛋白质、脂类和DNA的氧化性损伤[1]。
抗氧化水凝胶贴剂是根据UV照射造成皮肤损伤的机理，以缓解临床症状、修复损伤皮肤为目标，经科学的方法筛选、优化形成的配方，包括海藻糖、透明质酸钠、芦荟提取物、积雪草提取物、螺旋藻多糖等原料。制成水凝胶贴剂具有保湿性强、载药量大、剂量准确、清爽不油腻、使用方便等优势，适合于皮肤局部使用。在对配方筛选、质量标准研究的基础上，对抗氧化水凝胶贴剂的功效和作用机理也进行了研究，以进一步验证配方的可行性。
1 材料与方法
1.1 动物 30只健康成年白色新西兰家兔由广东省实验动物中心提供[动物生产许可证号：SCXK（粤）2019-0035;动物合格证号：44116000003 54]， 体重2.0～2.5kg，无皮肤疾病史，雌雄不限。
1.2 材料 聚丙烯酸钠（NP700）、甘油、丙二醇、甘羟铝、PVPK-30、氮酮、聚乙烯吡咯烷酮（PVPK-30）、海藻糖、透明质酸钠、积雪草提取物、螺旋藻多糖、胶原蛋白、芦荟提取物、神经酰胺、聚谷氨酸钠、抗坏血酸葡糖苷、乙酰壳糖胺、无纺布、玻璃板（10cm×20cm）。超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）检测试剂盒均为南京建成生物工程研究所生产。
1.3 仪器 透射电子显微镜（日本日立公司）、电子天平（梅特勒-托利多）、恒温水浴箱（上海赫田科学仪器有限公司）、UVA灯管 （40W）、紫外线辐射仪（江苏省金坛市宏华仪器厂）、紫外可见光分光光度计（日本日立公司）。
1.4 受试物制作 将5.0g NP700与50.0g甘油的混合液低速搅拌混合均匀，加入组合物5.0g（海藻糖、透明质酸钠、芦荟提取物、积雪草提取物、螺旋藻多糖、胶原蛋白、神经酰胺、聚谷氨酸钠、抗坏血酸葡糖苷、乙酰壳糖胺）、2.0g PVPK-30、0.4g甘羟铝、2.5g氮酮、2.5g丙二醇，低速搅拌混合均匀后作为A相，0.4g酒石酸溶于32.2g水中作为B相。在一定转速搅拌下将A和B相混合，充分搅拌成黏稠状半固态流体，均匀涂布于无纺布上，盖上背衬，室温放置24h，冲切成5cm×5cm大小，包装即得。
1.5 动物分组 30只无皮肤病史的健康家兔，适应饲养7d后随机分为6组，对照1组、对照2组、模型组、治疗A组、治疗B组和治疗C组。
1.6 实验方法 参照文献方法[2]，每只动物在背部两侧剃出5cm×5cm的两块裸露皮肤。除对照组外，其余四组采用紫外灯照射造模，辐照强度10Mw/cm2，每天照射2h，连续30d。对照1组在其余组给药时涂抹生理盐水;对照2组，每天贴一片抗氧化水凝胶贴剂，贴敷3h后撕下;模型组在紫外灯照射后，涂抹生理盐水;治疗A组在紫外灯照射后贴一片抗氧化水凝胶贴剂，贴敷1h后撕下;治疗B组在紫外灯照射后贴一片抗氧化水凝胶贴剂，贴敷2h后撕下;治疗C组在紫外灯照射后贴一片抗氧化水凝胶贴剂，贴敷3h后撕下。 1.7 评价指标
1.7.1 创面外观情况 参照文献方法进行评价[3]，每天定时观察、记录每只动物皮肤变化情况。按照创面情况评分表评分。以最后一天观察记录数据作为统计用数据。
1.7.2 检测指标 用药结束后第2天，麻醉家兔，每只家兔取裸露部分皮肤，处理后按试剂盒说明书检测SOD、CAT和MDA的含量。
1.8 统计学方法 采用SPSS13.0软件统计数据。其中计量资料采用均数加减标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验，三组间比较采用方差分析，P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 创面外观情况 模型组动物UVB 照射后第5天开始出现皮肤发红、蜕皮的现象，第12天起开始出现红斑、红肿、出血、渗出等现象，并逐渐加重，反复蜕皮、结痂，无新毛长出。治疗A组动物UVB 照射后第8天开始出现皮肤发红、蜕皮的现象，第15天起开始出现红斑、红肿、出血、渗出等现象，有少量新毛长出;治疗B组动物UVB 照射后第12天开始出现皮肤发红、蜕皮的现象，第18天起开始出现红斑、红肿、出血、渗出等现象，反复蜕皮、结痂，新毛长出明显;治疗C组动物UVB 照射后第15天开始出现皮肤发红、蜕皮的现象，第20天起开始出现红斑、红肿、出血、渗出等现象，较为轻微，发展速度慢，新毛逐渐长出;对照1组动物刮毛后很快有绒毛均匀长出，7d覆盖满，并均匀生长;对照2组动物刮毛区域未出现红斑、水肿、出血等不良反应，绒毛生长快，阴性对照组小鼠剃毛后，很快有绒毛均匀覆盖于背部，背毛生长快且均匀，5d覆盖满。
创伤情况评分详见表2，两个对照组脱毛区域未出现红斑、水肿、出血、渗出症状。模型组与对照1组比较，红斑、水肿、出血、渗出评分明显升高（P<0.01），说明造模成功。3个治疗组与模型组对比，红斑、水肿、出血、渗出症状均有明显改善（P<0.01）。
2.2 检测指标结果 抗氧化水凝胶贴剂对紫外照射家兔皮肤SOD、CAT和MDA含量影响结果见表3。模型组与对照1组比较，SOD和CAT含量明显降低，MDA含量明显升高（P<0.01），说明造模成功。3个治疗组与模型组比较，SOD和CAT含量明显升高， MDA含量明显降低（P<0.01）。对照2组与对照1组比较，SOD和CAT含量明显升高， MDA含量明显降低（P<0.01）。
3 讨论
UV的穿透力强，可透过表皮直达真皮层，且有蓄积的作用，长时间的照射可以导致皮肤红斑、水肿、增厚、色素沉着、免疫抑制、老化甚至是皮肤肿瘤的发生。研究表明[4]UV对皮肤损伤的作用机制主要有：引起皮肤氧化应激、引起细胞炎症、引起细胞凋亡、引起弹性相关物质降解。
根据UV照射造成皮肤损伤的机理开发的抗氧化水凝胶贴剂，其主要成分有海藻糖、透明质酸钠、芦荟提取物、积雪草提取物、螺旋藻多糖、神经酰胺、聚谷氨酸钠、抗坏血酸葡糖苷、乙酰壳糖胺等。其中，海藻糖对生物膜、蛋白质和核酸有特异性保护作用，并可进入细胞发挥替代应激因子而起到抗氧化的作用，且可在细胞表面形成保护膜而起到保湿和细胞膜保护的作用[5-6]。芦荟提取物具有保湿、抗炎、角质软化，改善伤痕等作用[7]。积雪草提取物能促进真皮层中胶原蛋白的形成，使纤维蛋白再生，防止水肿，促进受损组织愈合[8]。螺旋藻多糖具有抗辐射、促进DHA合成的作用[9]。胶原蛋白有保湿、美白、防皱、祛斑等作用[10]。透明质酸钠、神经酰胺、聚谷氨酸钠均具有保持皮肤水分的作用[11-13]。組方中各种物质合用，起到抗辐射、抗氧化、抑制水肿、促进组织愈合、保湿、美白的功效。制成凝胶贴剂，其中的透皮剂可进一步地促进药物的吸收、发挥药效，且使用方便。本次实验结果也证明，健康皮肤家兔使用抗氧化凝胶贴剂后，SOD和CAT含量明显升高，说明皮肤抗氧化能力提高。3个治疗组在同等UV照射下，给药剂量越大的治疗组皮肤损伤症状越轻、恢复越快，且SOD和CAT含量与模型组比较有明显升高。结果显示，抗氧化凝胶贴剂对UV照射造成的皮肤损伤症状有一定改善和延缓作用，说明抗氧化凝胶贴剂对UV照射造成的皮肤损伤有一定的修复作用，其作用机理可能是通过减少皮肤氧化应激实现的。
参考文献
[1]黄剑，马晓彤，张亚杰，等.表皮生长因子（EGF）对紫外线引起的皮肤损伤保护作用的研究进展[J].教育教学论坛，2020（6）：272-273.
[2]郝光荣.实验动物学[M].2版.上海：第二军医大学出版社，2002：184-185.
[3]中华人民共和国卫生部药政局.中药新药临床研究指南（药学、药理学、毒理学）[M].北京：人民卫生出版社，1994：209-212.
[4]路婷婷，陈亚泽，卢涛，等.紫外线的皮肤损伤机制及具有紫外线防护作用的天然产物的研究进展[J].中国药理学通报，2012，28（12）：1655-1659.
[5]丁利营，李红艳，赵绛波，等.皮肤屏障修复贴海藻糖敷料对面部激光术后皮肤修复的临床观察[J].中国医疗美容，2017，7（1）：35-39.
[6]靳文斌，李克文，胥九兵，等.海藻糖的特性、功能及应用[J].精细与专用化学品，2015，23（1）：30-33.
[7]王莹，董怡，许宝宁.植物提取物在化妆品中的应用及展望[J].杭州化工，2016，46（2）：11-14.
[8]严明强，任娟.积雪草提取物在个人护理品中的应用[J].香料香精化妆品，2009（6）：44-46.
[9]李建涛，张倩，张建民.螺旋藻多糖功能及应用的研究进展[J].黑龙江农业科学，2013（11）：144-146.
[10]吴斌杰，倪海良，朱敏良，等.透明质酸研究进展及应用[J].中国美容整形外科杂志，2018，29（4）：252-254，262.
[11]邓浩，党政，尹青春，等.胶原蛋白的研究进展[J].广州化工，2019，47（18）：27-30.
[12]Leona.神经酰胺肌肤年轻的秘密[J].中国化妆品，2019（11）：73-77.
[13]蔡丽娇，张少明，方平.医学护肤品活性成分与应用[J].海峡药学，2014，26（8）：108-109.
【关键词】 抗氧化贴剂;紫外线;皮肤损伤
Abstract：Objective To observe the repairing effect of Antioxidant Patch on skin damage caused by UV irradiation.Methods The model of rabbit skin injury induced by UV irradiation was established.The treatment group was treated with Antioxidant Patch for 30 days after UV irradiation.The changes of skin were observed and the contents of SOD，CAT and MDA in the skin were detected.Results The symptoms of erythema，edema，bleeding and exudation in the treatment group appeared later than that in the model group，and the symptoms were mild.The symptom scores of the treatment group and the model group were significantly improved，P<0.01.Compared with the model group，the content of SOD and CAT in the treatment group was significantly increased，while the content of MDA was significantly decreased （P< 0.01）.Conclusion The Antioxidant Patch has certain repair effect on the skin damage caused by UV irradiation.
Keywords：Antioxidant Patch;UV;Skin Damage
紫外線（Ultravioletray，UV）在自然界中无处不在，其对皮肤的损伤已有大量的研究。皮肤长期受紫外线照射，会造成积累性的损伤，表现为皮肤变黑、色斑、皮肤松弛、皱纹加深;严重的导致局部红肿、出血、炎症反应等。其作用机制之一是紫外线使人体皮肤中活性氧自由基含量急剧升高，进而会破坏正常组织细胞的大分子物质代谢，导致蛋白质、脂类和DNA的氧化性损伤[1]。
抗氧化水凝胶贴剂是根据UV照射造成皮肤损伤的机理，以缓解临床症状、修复损伤皮肤为目标，经科学的方法筛选、优化形成的配方，包括海藻糖、透明质酸钠、芦荟提取物、积雪草提取物、螺旋藻多糖等原料。制成水凝胶贴剂具有保湿性强、载药量大、剂量准确、清爽不油腻、使用方便等优势，适合于皮肤局部使用。在对配方筛选、质量标准研究的基础上，对抗氧化水凝胶贴剂的功效和作用机理也进行了研究，以进一步验证配方的可行性。
1 材料与方法
1.1 动物 30只健康成年白色新西兰家兔由广东省实验动物中心提供[动物生产许可证号：SCXK（粤）2019-0035;动物合格证号：44116000003 54]， 体重2.0～2.5kg，无皮肤疾病史，雌雄不限。
1.2 材料 聚丙烯酸钠（NP700）、甘油、丙二醇、甘羟铝、PVPK-30、氮酮、聚乙烯吡咯烷酮（PVPK-30）、海藻糖、透明质酸钠、积雪草提取物、螺旋藻多糖、胶原蛋白、芦荟提取物、神经酰胺、聚谷氨酸钠、抗坏血酸葡糖苷、乙酰壳糖胺、无纺布、玻璃板（10cm×20cm）。超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）检测试剂盒均为南京建成生物工程研究所生产。
1.3 仪器 透射电子显微镜（日本日立公司）、电子天平（梅特勒-托利多）、恒温水浴箱（上海赫田科学仪器有限公司）、UVA灯管 （40W）、紫外线辐射仪（江苏省金坛市宏华仪器厂）、紫外可见光分光光度计（日本日立公司）。
1.4 受试物制作 将5.0g NP700与50.0g甘油的混合液低速搅拌混合均匀，加入组合物5.0g（海藻糖、透明质酸钠、芦荟提取物、积雪草提取物、螺旋藻多糖、胶原蛋白、神经酰胺、聚谷氨酸钠、抗坏血酸葡糖苷、乙酰壳糖胺）、2.0g PVPK-30、0.4g甘羟铝、2.5g氮酮、2.5g丙二醇，低速搅拌混合均匀后作为A相，0.4g酒石酸溶于32.2g水中作为B相。在一定转速搅拌下将A和B相混合，充分搅拌成黏稠状半固态流体，均匀涂布于无纺布上，盖上背衬，室温放置24h，冲切成5cm×5cm大小，包装即得。
1.5 动物分组 30只无皮肤病史的健康家兔，适应饲养7d后随机分为6组，对照1组、对照2组、模型组、治疗A组、治疗B组和治疗C组。
1.6 实验方法 参照文献方法[2]，每只动物在背部两侧剃出5cm×5cm的两块裸露皮肤。除对照组外，其余四组采用紫外灯照射造模，辐照强度10Mw/cm2，每天照射2h，连续30d。对照1组在其余组给药时涂抹生理盐水;对照2组，每天贴一片抗氧化水凝胶贴剂，贴敷3h后撕下;模型组在紫外灯照射后，涂抹生理盐水;治疗A组在紫外灯照射后贴一片抗氧化水凝胶贴剂，贴敷1h后撕下;治疗B组在紫外灯照射后贴一片抗氧化水凝胶贴剂，贴敷2h后撕下;治疗C组在紫外灯照射后贴一片抗氧化水凝胶贴剂，贴敷3h后撕下。 1.7 评价指标
1.7.1 创面外观情况 参照文献方法进行评价[3]，每天定时观察、记录每只动物皮肤变化情况。按照创面情况评分表评分。以最后一天观察记录数据作为统计用数据。
1.7.2 检测指标 用药结束后第2天，麻醉家兔，每只家兔取裸露部分皮肤，处理后按试剂盒说明书检测SOD、CAT和MDA的含量。
1.8 统计学方法 采用SPSS13.0软件统计数据。其中计量资料采用均数加减标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验，三组间比较采用方差分析，P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 创面外观情况 模型组动物UVB 照射后第5天开始出现皮肤发红、蜕皮的现象，第12天起开始出现红斑、红肿、出血、渗出等现象，并逐渐加重，反复蜕皮、结痂，无新毛长出。治疗A组动物UVB 照射后第8天开始出现皮肤发红、蜕皮的现象，第15天起开始出现红斑、红肿、出血、渗出等现象，有少量新毛长出;治疗B组动物UVB 照射后第12天开始出现皮肤发红、蜕皮的现象，第18天起开始出现红斑、红肿、出血、渗出等现象，反复蜕皮、结痂，新毛长出明显;治疗C组动物UVB 照射后第15天开始出现皮肤发红、蜕皮的现象，第20天起开始出现红斑、红肿、出血、渗出等现象，较为轻微，发展速度慢，新毛逐渐长出;对照1组动物刮毛后很快有绒毛均匀长出，7d覆盖满，并均匀生长;对照2组动物刮毛区域未出现红斑、水肿、出血等不良反应，绒毛生长快，阴性对照组小鼠剃毛后，很快有绒毛均匀覆盖于背部，背毛生长快且均匀，5d覆盖满。
创伤情况评分详见表2，两个对照组脱毛区域未出现红斑、水肿、出血、渗出症状。模型组与对照1组比较，红斑、水肿、出血、渗出评分明显升高（P<0.01），说明造模成功。3个治疗组与模型组对比，红斑、水肿、出血、渗出症状均有明显改善（P<0.01）。
2.2 检测指标结果 抗氧化水凝胶贴剂对紫外照射家兔皮肤SOD、CAT和MDA含量影响结果见表3。模型组与对照1组比较，SOD和CAT含量明显降低，MDA含量明显升高（P<0.01），说明造模成功。3个治疗组与模型组比较，SOD和CAT含量明显升高， MDA含量明显降低（P<0.01）。对照2组与对照1组比较，SOD和CAT含量明显升高， MDA含量明显降低（P<0.01）。
3 讨论
UV的穿透力强，可透过表皮直达真皮层，且有蓄积的作用，长时间的照射可以导致皮肤红斑、水肿、增厚、色素沉着、免疫抑制、老化甚至是皮肤肿瘤的发生。研究表明[4]UV对皮肤损伤的作用机制主要有：引起皮肤氧化应激、引起细胞炎症、引起细胞凋亡、引起弹性相关物质降解。
根据UV照射造成皮肤损伤的机理开发的抗氧化水凝胶贴剂，其主要成分有海藻糖、透明质酸钠、芦荟提取物、积雪草提取物、螺旋藻多糖、神经酰胺、聚谷氨酸钠、抗坏血酸葡糖苷、乙酰壳糖胺等。其中，海藻糖对生物膜、蛋白质和核酸有特异性保护作用，并可进入细胞发挥替代应激因子而起到抗氧化的作用，且可在细胞表面形成保护膜而起到保湿和细胞膜保护的作用[5-6]。芦荟提取物具有保湿、抗炎、角质软化，改善伤痕等作用[7]。积雪草提取物能促进真皮层中胶原蛋白的形成，使纤维蛋白再生，防止水肿，促进受损组织愈合[8]。螺旋藻多糖具有抗辐射、促进DHA合成的作用[9]。胶原蛋白有保湿、美白、防皱、祛斑等作用[10]。透明质酸钠、神经酰胺、聚谷氨酸钠均具有保持皮肤水分的作用[11-13]。組方中各种物质合用，起到抗辐射、抗氧化、抑制水肿、促进组织愈合、保湿、美白的功效。制成凝胶贴剂，其中的透皮剂可进一步地促进药物的吸收、发挥药效，且使用方便。本次实验结果也证明，健康皮肤家兔使用抗氧化凝胶贴剂后，SOD和CAT含量明显升高，说明皮肤抗氧化能力提高。3个治疗组在同等UV照射下，给药剂量越大的治疗组皮肤损伤症状越轻、恢复越快，且SOD和CAT含量与模型组比较有明显升高。结果显示，抗氧化凝胶贴剂对UV照射造成的皮肤损伤症状有一定改善和延缓作用，说明抗氧化凝胶贴剂对UV照射造成的皮肤损伤有一定的修复作用，其作用机理可能是通过减少皮肤氧化应激实现的。
参考文献
[1]黄剑，马晓彤，张亚杰，等.表皮生长因子（EGF）对紫外线引起的皮肤损伤保护作用的研究进展[J].教育教学论坛，2020（6）：272-273.
[2]郝光荣.实验动物学[M].2版.上海：第二军医大学出版社，2002：184-185.
[3]中华人民共和国卫生部药政局.中药新药临床研究指南（药学、药理学、毒理学）[M].北京：人民卫生出版社，1994：209-212.
[4]路婷婷，陈亚泽，卢涛，等.紫外线的皮肤损伤机制及具有紫外线防护作用的天然产物的研究进展[J].中国药理学通报，2012，28（12）：1655-1659.
[5]丁利营，李红艳，赵绛波，等.皮肤屏障修复贴海藻糖敷料对面部激光术后皮肤修复的临床观察[J].中国医疗美容，2017，7（1）：35-39.
[6]靳文斌，李克文，胥九兵，等.海藻糖的特性、功能及应用[J].精细与专用化学品，2015，23（1）：30-33.
[7]王莹，董怡，许宝宁.植物提取物在化妆品中的应用及展望[J].杭州化工，2016，46（2）：11-14.
[8]严明强，任娟.积雪草提取物在个人护理品中的应用[J].香料香精化妆品，2009（6）：44-46.
[9]李建涛，张倩，张建民.螺旋藻多糖功能及应用的研究进展[J].黑龙江农业科学，2013（11）：144-146.
[10]吴斌杰，倪海良，朱敏良，等.透明质酸研究进展及应用[J].中国美容整形外科杂志，2018，29（4）：252-254，262.
[11]邓浩，党政，尹青春，等.胶原蛋白的研究进展[J].广州化工，2019，47（18）：27-30.
[12]Leona.神经酰胺肌肤年轻的秘密[J].中国化妆品，2019（11）：73-77.
[13]蔡丽娇，张少明，方平.医学护肤品活性成分与应用[J].海峡药学，2014，26（8）：108-109.