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目的探索可复性永生化大鼠皮肤成纤维细胞的建立方法。方法采用胰酶消化法分离培养大鼠皮肤成纤维细胞；逆转录病毒载体（SSR69）转染成纤维细胞，筛选：稳定表达SV40LTag的永生化成纤维细胞；用表达Cre重组酶的腺病毒感染永生化成纤维细胞，筛选获得回复后成纤维细胞。对原代、永生化及回复后成纤维细胞，倒置显微镜下观察细胞生长状态；采用细胞生长曲线法测定细胞增殖能力。免疫荧光染色检测Vimentin在原代及永生化成纤维细胞中的表达情况，平板克隆实验评价回复后成纤维细胞的致瘤性。结果提取了大鼠皮肤成纤维细胞，并筛