【摘 要】
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目的:建立氨基酸的柱前衍生化HPLC测定法用于壳聚糖中残留蛋白质的检查。方法:壳聚糖样品经酸水解并以9-芴甲氧羰酰氯柱前衍生,用5 mmol.L-1醋酸铵缓冲液(pH 6.7)-乙腈(80∶2
【机 构】
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江南大学食品学院食品科学与工程国家重点实验室; 中国药科大学药学院; 江南大学医药学院;
【基金项目】
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国家“863”计划项目(2007AA091603);江苏省科技成果转化专项资金项目(BA2009082);食品科学与工程国家重点实验室年度目标导向项目(SKLF-MB-200805);中央高校基本科研业务费专项资金资助(JKQ2011024);国家自然科学基金(81202491)
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目的:建立氨基酸的柱前衍生化HPLC测定法用于壳聚糖中残留蛋白质的检查。方法:壳聚糖样品经酸水解并以9-芴甲氧羰酰氯柱前衍生,用5 mmol.L-1醋酸铵缓冲液(pH 6.7)-乙腈(80∶20)和5 mmol.L-1醋酸铵缓冲液(pH 6.7)-乙腈(20∶80)为流动相梯度洗脱,C18柱分离后,以荧光检测器在266 nm激发波长、313 nm发射波长处检测,外标法计算各氨基酸含量,并以总氨基酸含量作为壳聚糖中蛋白质残留量。结果:各氨基酸分离良好,过量衍生试剂和氨基葡萄糖衍生产物仅对Leu、Ile、Phe产生干扰。各氨基酸浓度在0.01～5.0μg.mL-1范围内线性关系良好(r>0.99),精密度(RSD)为1.6%～8.5%,定量限为1.9～10.9 ng.mL-1,回收率为83.4%～99.3%。结论:本方法可准确测定壳聚糖中13个氨基酸并用于壳聚糖中微量蛋白质残留的检查,为评价壳聚糖质量,保证壳聚糖在医药和生物材料使用的安全性提供依据。
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