【摘 要】
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将DNA错配修复基因mutS(2.56kb)克隆于分泌型原核表达载体pET32a(+)上,以N端融合6个组氨酸的形式在E.coli AD494(DE3)中进行了IPTG诱导表达.SDS-PAGE分析证实有一与预期分子
【机 构】
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中国科学院武汉病毒所,中国科学院沈阳应用生态研究所,Biochemistry Department
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将DNA错配修复基因mutS(2.56kb)克隆于分泌型原核表达载体pET32a(+)上,以N端融合6个组氨酸的形式在E.coli AD494(DE3)中进行了IPTG诱导表达.SDS-PAGE分析证实有一与预期分子量相应的诱导表达条带,其表达量占全菌蛋白质的35%左右,且表达蛋白以可溶形式存在.利用固定化金属离子(Ni2+)配体亲和层析柱纯化目的蛋白,其纯度为90%以上.与含有错配碱基DNA双链的结合反应证明该蛋白具有特异性识别、结合含有错配碱基DNA双链的生物活性.
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