pGEX-e23 (scFv) PE40融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

来源 :第四军医大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lwk2293366
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目的 在大肠杆菌中表达抗原癌基因c-erbB-2表达产物p185的单 链抗体e23(scFv)/假单孢菌属外毒素活性片 段PE40免疫毒素的融合蛋白,为乳腺癌、胃癌等多种c-erbB-2呈过量表达的恶性肿瘤的免疫治疗奠定基础. 方法 去除克隆在真核表达载体pLNCX中的e23 (scFv) PE40基因5′端编码信号肽的核苷酸序列,并将改建后的融合基因克隆到原核融合表达载体pGEX-4T中表达. 结果 序列测 定 表明. 改建后的抗p185 e23(scFv)/PE40序列正确. 融合基因经IPTG诱导表达4 h后,经SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,在Mr 90 000处出现一条新生蛋白带,表达量约占菌体总蛋白的15%. 结论 成功改建并在原核中表达了抗p185 e23 (scFv)/ PE40融合蛋白.
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