【摘 要】
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目的针对Rab25基因3’端非翻译区(untranslated region,3’UTR)构建Rab25荧光素酶报告基因载体及突变体,为研究miR-125a-5p在肺癌耐药中调控其靶基因RAB25提供有效的工具。方
【机 构】
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遵义医学院附属医院肿瘤医院暨贵州省生物治疗人才基地,
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目的针对Rab25基因3’端非翻译区(untranslated region,3’UTR)构建Rab25荧光素酶报告基因载体及突变体,为研究miR-125a-5p在肺癌耐药中调控其靶基因RAB25提供有效的工具。方法 PCR扩增包含Rab25的3’UTR的DNA片段,克隆至荧光素酶载体GV306,构建GV306/Rab25’UTR载体;通过Trget Scan Release 6.2查找Rab25与miR-125a-5p结合区域并设计突变序列,参照构建GV306/Rab25’UTR载体方法构建GV306/Rab25’UTR突变载体。结果通过获得Rab25与miR-125a-5p的种子区域及侧翼部分120~126 nt,并上下延伸150 bp,合成Rab25’UTR,并且在120~126 nt区域设计突变序列,构建了GV306/Rab25 3’UTR及其突变载体。结论成功构建了含Rab25基因3’UTR区的荧光素酶报告基因载体及突变体,为进一步研究Rab25在非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药中的作用打下基础。
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