【摘 要】
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目的应用荧光共振能量转移（FRET）法检测丙型肝炎病毒（HCV）丝氨酸蛋白水解酶（NS3-4A）活性,建立HCV蛋白酶抑制剂筛选模型。方法将质粒pMAL-c2/NS3-4A转化到大肠杆菌K12TB1中,经异丙基
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所病毒室
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目的应用荧光共振能量转移（FRET）法检测丙型肝炎病毒（HCV）丝氨酸蛋白水解酶（NS3-4A）活性,建立HCV蛋白酶抑制剂筛选模型。方法将质粒pMAL-c2/NS3-4A转化到大肠杆菌K12TB1中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,亲和层析柱纯化得到麦芽糖结合的NS3-4A融合蛋白,用FRET法测定蛋白水解酶活性,建立特异性蛋白酶抑制剂筛选模型,优化反应体系,评价模型的可靠性。结果建立了HCV蛋白酶抑制剂高通量筛选模型,经优化确定了酶及底物用量。在模型可靠性评价中,Z因子高达0.80
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