【摘 要】
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目的:构建SUZ12基因过表达和敲减的恶性外周神经鞘瘤(MPNST)稳定细胞株并探讨其意义.方法:PCR合成SUZ12基因全长并设计合成SUZ12基因的3对特异性sgRNA干扰靶点序列(sgRNA-1、
【机 构】
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天津医科大学病原生物学系,天津,300070天津医科大学基础医学院,天津,300070;遵义医科大学珠海校区临床医学系,珠海,519090;多伦多大学圣乔治校区,多伦多ONM5S;
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目的:构建SUZ12基因过表达和敲减的恶性外周神经鞘瘤(MPNST)稳定细胞株并探讨其意义.方法:PCR合成SUZ12基因全长并设计合成SUZ12基因的3对特异性sgRNA干扰靶点序列(sgRNA-1、sgRNA-2、sgRNA-3),构建重组表达质粒,转染293T细胞,包装慢病毒颗粒并用荧光法测定其滴度.确定慢病毒感染的最适MOI以及嘌呤霉素筛选的最适剂量,转染ST88-14细胞,构建过表达及敲减的MPNST稳定细胞株.荧光显微镜观察稳定株绿色荧光蛋白的表达情况,RT-qPCR在mRNA水平进行验证,MTT法检测SUZ12过表达和敲减组增殖活性的改变.结果:LV-SUZ 12和LV-SUZ 12-sgRNA转导入ST88-14细胞并稳定表达绿色荧光蛋白,RT-qPCR结果显示过表达稳定株SUZ12表达量明显升高(P＜0.05),CRISPR/Cas9敲减稳定株SUZ12表达量明显下降(P＜0.05).MTT结果显示过表达SUZ12基因抑制MPNST细胞的增殖.结论:SUZ12过表达和敲减的稳定细胞株构建成功,初步验证结果表明过表达SUZ12基因抑制MPNST细胞的增殖,为针对SUZ12在MPNST中的生物学功能、作用机制和疾病诊断治疗的进一步研究提供了实验基础.
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