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目的 验证角膜缘干细胞的组织学定位,探讨低温冷冻保存对其增殖活性的影响.方法取新鲜角膜缘上皮组织和相应部位浅层巩膜组织各10块进行体外细胞培养,对比观察细胞生长情况.取冷冻保存的角膜缘上皮组织14例,观察体外培养后细胞生长情况.通过免疫组化方法检测冷冻保存的角膜缘上皮细胞的增殖活性和培养后单层细胞K3角蛋白的表达.结果10例新鲜角膜缘上皮组织培养后,7例有上皮细胞生长,1周形成细胞单层;10例浅层巩膜组织培养后未见细胞生长.14例冷冻角膜缘上皮组织培养后,4例有上皮细胞生长,9 d形成细胞单层.5例冷冻角巩膜环组织冰冻切片中,3例可见角膜缘上皮基底细胞PCNA表达阳性.培养细胞对K3角蛋白特异性的AE-5单克隆抗体免疫反应阳性.结论角膜缘干细胞定位于角膜缘上皮基底部,低温冷冻保存的角膜缘干细胞组织可以保持增殖活性,体外培养后生长分化成为角膜上皮。