【摘 要】
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按照大肠杆菌偏爱密码子合成编码"BspTI位点-连接肽(Gly-Ser-Gly-Ser-Gly-6His-Tag-Ek-site(Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)"序列的DNA序列,利用重叠延伸拼接技术,将其与色氨酸酶基因T
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按照大肠杆菌偏爱密码子合成编码"BspTI位点-连接肽(Gly-Ser-Gly-Ser-Gly-6His-Tag-Ek-site(Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)"序列的DNA序列,利用重叠延伸拼接技术,将其与色氨酸酶基因TnaA拼接,利用BspTI和HindⅢ重组至pET-39二硫键形成蛋白DsbA基因的下游,转化表达宿主Escherichia coliBL21(DE3),成功构建分泌融合表达型色氨酸酶基因工程菌.通过摇瓶培养实验研究了诱导剂浓度、诱导温度及诱导时间对色氨酸酶活性的影响.工程菌以含2%甘油的LB为培养基,A600=0.5时,加入终浓度为0.05 mmol/L的Isopropyl-βD-1-thiogalactopyranoside(IPTG),30℃诱导培养8 h,可在周质空间中表达高活性的色氨酸酶融合蛋白.在培养基中添加0.5%的甘氨酸,酶活可提高6.3倍.本实验首次实现了色氨酸酶基因的周质分泌融合表达.
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