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【摘 要】 目的：考察闽产太子参“柘参2号”与新品种“柘参3号”浸出物及多糖含量的差异，为不同品种太子参质量评价奠定基础。方法：采用冷浸法测定太子参水溶性浸出物含量;采用加热回流提取、苯酚硫酸法测定太子参中多糖含量。结果：15批次“柘参2号”太子参浸出物含量在29.78%～36.30%、多糖含量在31.14%～38.74%范围之间; 15批次“柘参3号”太子参浸出物含量在35.84%～43.83%，多糖含量在32.16%～41.48%范围之间。结论：“柘参3号”太子参浸出物和多糖含量均显著高于“柘参2号”，新品种“柘参3号”太子参在浸出物、多糖含量指标方面优于“柘参2号”。
【关键词】 太子参;柘参2号;柘参3号;浸出物;多糖
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2019）3-0021-03
Abstract：Objective To inspection the difference of the extracts and polysaccharide content of the new cultivar “Zheshen No.3”（ZS3） and the “Zheshen No.2”（ZS2）， and to lay the foundation for quality evaluation of high quality varieties of Radix Pseudostellariae. Methods The method of cold soak in the determination of the extract was used to determine ZS2 and ZS3 ; The content of polysaccharides in Radix Pseudostellariae was determined by heating reflux extraction and phenol sulfuric acid method.Results The extracts of the 15 batches of Radix Pseudostellariae in the ZS2 ranged from 29.78% to 36.30%，and the content of polysaccharides ranged from 31.14% to 38.74%. The extracts of the 15 batches of Radix Pseudostellariae in the ZS3 ranged from 35.84% to 43.83%，and the content of polysaccharides ranged from 32.16% to 41.48%.Conclusion The extracts and polysaccharide content of the new cultivar ZS3 is significantly higher than that of ZS2， to a certain extent， it can reflect that the quality of the new variety of ZS3 is higher than that of ZS2.
Keywords：Pseudostellaria heterophylla; Zheshen No.2; Zheshen No.3; Extract; Polysaccharides
太子参为石竹科植物孩儿参Pseudostellaria haterophylla （Miq.）Pax ex Pax et Hoffm.的干燥块根，系福建道地药材，福建柘荣县誉为“中国太子参之乡”。柘荣地区太子参常见品种为“柘参1号”和“柘参2号”，其中“柘参2号”的品质较为稳定、产量较高，当地种植面积达80%以上[1]。但由于太子参栽培过程长期采用块根进行无性繁殖、栽培品种较单一，致使太子参种质退化、病害加剧，因此需要进一步研究开发优质太子参品种。叶祖云等[2]应用植物多倍体诱导技术，培育出新品种即“柘参3号”，通过了福建省农作物品种认定。多倍体通常能引起营养器官体积增大和次生代谢产物增多，且在培育过程中采用茎尖脱毒组培育苗技术，使得种苗更健康，因此“柘参3号”太子参在栽培过程中表现出块根大、产量高、生长健壮等特点;但作为药材，新品种“柘参3号”太子参的质量，应该从多方面进行系统评价。本研究拟从多糖及浸出物含量两个指标，以“柘参2号”作对照，初步考察“柘参3号”太子参的质量。
1 儀器与材料
1.1 仪器 UV-3200紫外可见分光光度计 （配备UV-Vis Analyst 紫外可见分光光度计应用系统，上海美谱达仪器有限公司）;AE240S电子分析天平（梅特勒-托利多有限公司）;HH-6数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）;DHG-9123A电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）。
1.2 材料 “柘参2号”太子参，购自福建柘荣太子参种植基地;“柘参3号”太子参，由福建西岸生物科技有限公司和宁德市南岭农业有限公司提供，从中随机各抽取15批次样品测定其浸出物及多糖含量。
D-无水葡萄糖对照品（批号：110833-201506，中国食品药品检定研究院）;硫酸（分析纯，批号：160123，西陇化工股份有限公司）;苯酚（批号：20161018）、无水乙醇（批号：20170424）购自国药集团化学试剂有限公司。
2 方法与结果
2.1 太子参水溶性浸出物测定 按照2015年版《中华人民共和国药典》水溶性浸出物测定法项下的冷浸法进行测定。准确称取太子参粉末4g，每个批次平行3份，置于250mL锥形瓶中，精密加水100mL，密塞，冷浸，前6小时内时时振摇，再静置18小时，用干燥过滤器迅速滤过，精密量取续滤液20mL，置于干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3h;置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量，计算各批次太子参药材中浸出物含量。 2.2 太子参中多糖含量测定
2.2.1 对照品溶液的制备 准确称取D-无水葡萄糖对照品0.01824g，加蒸馏水溶解，定容至200mL容量瓶中，配制成浓度为91.20μg /mL的对照品溶液，作为母液。分别精密吸取母液1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0mL，加水定容至5mL，配制成浓度为18.24、27.36、36.48、54.72、72.96、91.20μg /mL的对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 称取太子参（粉碎过3号筛）0.1000g，精密称定，置于索氏提取器中，加入85%乙醇100mL，90 ℃水浴加热1.5h，弃去乙醇液，药渣挥干乙醇。药渣连同纸筒置于圆底烧瓶中，精确加入100mL蒸馏水，称重，水浴加热回流提取2h，放冷后加水补重，混匀，过滤。精确量取滤液20mL置100mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度线，即得供试品溶液。
2.2.3 线性关系考察 精密吸取各对照品溶液lmL，置10mL具塞试管中，精密加入5%苯酚溶液1mL，摇匀;再精密加硫酸5mL，摇匀。置沸水浴中加热20min，取出，置冰浴中冷却5min。以1mL水按同样显色操作为空白，分别在490nm 波长处测定吸光度。以葡萄糖浓度（μg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程，y=0.0089x+0.0195，r=0.9997，表明葡萄糖在18.24～91.20μg/mL范围内线性关系良好。
2.2.4 精密度试验 精密吸取供试品溶液1mL，按“2.2.3项”下的方法操作，连续测定6次，吸光度RSD值为0.04% ，表明仪器精密度良好。
2.2.5 稳定性试验 精密吸取供试品溶液1mL，按“2.2.3项”下的方法操作，分别于0、30、60、90、120min测定吸光度，吸光度RSD值为0.05%，表明在120min内样品具有良好的稳定性。
2.2.6 重复性试验 称取太子参（粉碎过3号筛）0.1g，6份，精密称定，按“2.2.3项”下方法制备样品溶液，按“2.2.3项”下方法测定吸光度并计算多糖含量，结果太子参中多糖平均含量为34.39%，RSD为2.30%，表明该方法重复性良好。
2.2.7 加样回收试验 精密称取已知含量的太子参（粉碎过3号筛）0.0500g，9份，精密称定，分别加入葡萄糖对照品适量，使得高、中、低浓度对照品加入量与供试品中多糖含量之比约为0.5∶1、1∶1、1.5∶1各3份，按“2.2.2项”下方法制备样品溶液，按“2.2.3项”下方法测定吸光度并计算回收率。多糖的平均加样回收率为97.03%、101.13%、102.15%。
2.2.8 样品多糖含量测定 分别称取“柘参2号”与“柘参3号”太子参（粉碎过3号筛）0.1000g，精密称定，每个批次平行3份，按“2.2.2项”下方法制备样品溶液，按“2.2.3项”下方法测定吸光度，计算各批次太子参药材中多糖含量。
2.3 结果 “柘参2号”与“柘参3号”太子参水溶性浸出物及多糖含量测定结果由表1、表2可知，两个品种太子参水溶性浸出物含量范围在29.78%～45.83%之间，其中“柘参2号”太子参浸出物含量范围主要在32%～36 %之间，“柘参3号”太子参浸出物含量范围主要在38%～42%之间;两个品种太子参多糖含量范围在31.14%～41.48%之间，其中“柘参2号”太子参多糖含量范围主要在31%～35 %之间，“柘参3号”太子参多糖含量范围主要在35%～40%之间。
3 结论
浸出物可反映药材中化学成分总体积累水平，2015年版《中华人民共和国药典》要求太子参水溶性浸出物含量不得低于25%，其在太子参品质检测中作为一项重要的衡量标准[3]。本研究分别进行“柘参2号”和“柘参3号”15批次太子参的水溶性浸出物测定，其含量均符合药典要求。“柘参3号”太子参浸出物和多糖含量均显著高于“柘参2号”，说明新品种“柘参3号”太子参在浸出物、多糖含量指标方面优于“柘参2号”。
多糖是太子参中一类重要的水溶性成分，也是太子参中重要的有效成分。国内学者及本课题组研究表明，太子参多糖抗心肌缺血、增强人体免疫力，具有降低血糖、血脂、改善胰岛素抵抗等作用[4-7];已有较多学者研究太子参中多糖含量，以此作为太子参质量评价的重要指标之一[8-11]。研究通过对“柘参2号”与“柘参3号”太子参水溶性浸出物和多糖含量的测定，考察了“柘参2号”与“柘参3号”新品种太子参浸出物和多糖含量的差异性，“柘参3号”太子参在浸出物、多糖含量指标方面优于“柘参2号”。
综上，本研究从多糖及浸出物含量两个指标，初步考察“柘参3号”太子参的质量信息，为评价太子参新品种质量提供一定的数据基础;为客观反映新品种质量，还应从活性化学成分、药效学等多方面进行深入系统研究。
参考文献
[1]袁济端. 太子参新品种柘参1号、柘参2号的选育[J]. 广西热带农业， 2007（6）：39-41.
[2]Ye Zuyun， Wang Yaying， Tian Huiqiao. Regeneration of plantlets and tetraploidy induction in Pseudostellaria heterophylla[J]. Acta Biologica Cracoviensia Series Botanica， 2009， 51（2）：13-18.
[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：68.
[4]徐錦龙， 徐爱仁， 应景艳，等. 太子参多糖对实验性糖尿病大鼠血糖及胰岛素的影响. 中华中医药学刊， 2012， 30（2）： 423-424.
[5]姚先梅， 段贤春， 吴健， 等. 太子参多糖对实验性糖尿病大鼠血糖、血脂代谢和肾脏病理的影响[J]. 安徽医药， 2014， 18（1）：23-26.
[6]Juan Hu， Wensheng Pang， Jinlong Chen， et al. Hypoglycemic effect of polysaccharides with different molecular weight of Pseudostellaria heterophylla [J]. BMC Complementary And Alternative Medicine， 2013， 13（1）： 267.
[7]刘湘湘，阮君山.太子参多糖对大鼠心肌缺血的保护作用[J].中国民族民间医药， 2017， 26（17）：18-20.
[8]丁春花. 太子参种质质量评价及相关药效学研究[D]. 福州：福建中医药大学， 2013.
[9]康传志， 周涛， 江维克， 等. 贵州栽培太子参质量评价及生长区划[J].中国中药杂志， 2016， 41（13）：2391-2396.
[10]肖承鸿， 周涛， 江维克，等. 太子参新品种“施太1号”药材品质比较研究[J].中药材， 2017， 40（3）：511-517.
[11]杨昌贵， 江维克， 周涛， 等 . 不同种源太子参中多糖和氨基酸含量的比较研究[J].中国现代中药， 2014， 16（1）：32-37.
（收稿日期：2018-11-28 编辑：程鹏飞）
【关键词】 太子参;柘参2号;柘参3号;浸出物;多糖
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2019）3-0021-03
Abstract：Objective To inspection the difference of the extracts and polysaccharide content of the new cultivar “Zheshen No.3”（ZS3） and the “Zheshen No.2”（ZS2）， and to lay the foundation for quality evaluation of high quality varieties of Radix Pseudostellariae. Methods The method of cold soak in the determination of the extract was used to determine ZS2 and ZS3 ; The content of polysaccharides in Radix Pseudostellariae was determined by heating reflux extraction and phenol sulfuric acid method.Results The extracts of the 15 batches of Radix Pseudostellariae in the ZS2 ranged from 29.78% to 36.30%，and the content of polysaccharides ranged from 31.14% to 38.74%. The extracts of the 15 batches of Radix Pseudostellariae in the ZS3 ranged from 35.84% to 43.83%，and the content of polysaccharides ranged from 32.16% to 41.48%.Conclusion The extracts and polysaccharide content of the new cultivar ZS3 is significantly higher than that of ZS2， to a certain extent， it can reflect that the quality of the new variety of ZS3 is higher than that of ZS2.
Keywords：Pseudostellaria heterophylla; Zheshen No.2; Zheshen No.3; Extract; Polysaccharides
太子参为石竹科植物孩儿参Pseudostellaria haterophylla （Miq.）Pax ex Pax et Hoffm.的干燥块根，系福建道地药材，福建柘荣县誉为“中国太子参之乡”。柘荣地区太子参常见品种为“柘参1号”和“柘参2号”，其中“柘参2号”的品质较为稳定、产量较高，当地种植面积达80%以上[1]。但由于太子参栽培过程长期采用块根进行无性繁殖、栽培品种较单一，致使太子参种质退化、病害加剧，因此需要进一步研究开发优质太子参品种。叶祖云等[2]应用植物多倍体诱导技术，培育出新品种即“柘参3号”，通过了福建省农作物品种认定。多倍体通常能引起营养器官体积增大和次生代谢产物增多，且在培育过程中采用茎尖脱毒组培育苗技术，使得种苗更健康，因此“柘参3号”太子参在栽培过程中表现出块根大、产量高、生长健壮等特点;但作为药材，新品种“柘参3号”太子参的质量，应该从多方面进行系统评价。本研究拟从多糖及浸出物含量两个指标，以“柘参2号”作对照，初步考察“柘参3号”太子参的质量。
1 儀器与材料
1.1 仪器 UV-3200紫外可见分光光度计 （配备UV-Vis Analyst 紫外可见分光光度计应用系统，上海美谱达仪器有限公司）;AE240S电子分析天平（梅特勒-托利多有限公司）;HH-6数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）;DHG-9123A电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）。
1.2 材料 “柘参2号”太子参，购自福建柘荣太子参种植基地;“柘参3号”太子参，由福建西岸生物科技有限公司和宁德市南岭农业有限公司提供，从中随机各抽取15批次样品测定其浸出物及多糖含量。
D-无水葡萄糖对照品（批号：110833-201506，中国食品药品检定研究院）;硫酸（分析纯，批号：160123，西陇化工股份有限公司）;苯酚（批号：20161018）、无水乙醇（批号：20170424）购自国药集团化学试剂有限公司。
2 方法与结果
2.1 太子参水溶性浸出物测定 按照2015年版《中华人民共和国药典》水溶性浸出物测定法项下的冷浸法进行测定。准确称取太子参粉末4g，每个批次平行3份，置于250mL锥形瓶中，精密加水100mL，密塞，冷浸，前6小时内时时振摇，再静置18小时，用干燥过滤器迅速滤过，精密量取续滤液20mL，置于干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3h;置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量，计算各批次太子参药材中浸出物含量。 2.2 太子参中多糖含量测定
2.2.1 对照品溶液的制备 准确称取D-无水葡萄糖对照品0.01824g，加蒸馏水溶解，定容至200mL容量瓶中，配制成浓度为91.20μg /mL的对照品溶液，作为母液。分别精密吸取母液1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0mL，加水定容至5mL，配制成浓度为18.24、27.36、36.48、54.72、72.96、91.20μg /mL的对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 称取太子参（粉碎过3号筛）0.1000g，精密称定，置于索氏提取器中，加入85%乙醇100mL，90 ℃水浴加热1.5h，弃去乙醇液，药渣挥干乙醇。药渣连同纸筒置于圆底烧瓶中，精确加入100mL蒸馏水，称重，水浴加热回流提取2h，放冷后加水补重，混匀，过滤。精确量取滤液20mL置100mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度线，即得供试品溶液。
2.2.3 线性关系考察 精密吸取各对照品溶液lmL，置10mL具塞试管中，精密加入5%苯酚溶液1mL，摇匀;再精密加硫酸5mL，摇匀。置沸水浴中加热20min，取出，置冰浴中冷却5min。以1mL水按同样显色操作为空白，分别在490nm 波长处测定吸光度。以葡萄糖浓度（μg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程，y=0.0089x+0.0195，r=0.9997，表明葡萄糖在18.24～91.20μg/mL范围内线性关系良好。
2.2.4 精密度试验 精密吸取供试品溶液1mL，按“2.2.3项”下的方法操作，连续测定6次，吸光度RSD值为0.04% ，表明仪器精密度良好。
2.2.5 稳定性试验 精密吸取供试品溶液1mL，按“2.2.3项”下的方法操作，分别于0、30、60、90、120min测定吸光度，吸光度RSD值为0.05%，表明在120min内样品具有良好的稳定性。
2.2.6 重复性试验 称取太子参（粉碎过3号筛）0.1g，6份，精密称定，按“2.2.3项”下方法制备样品溶液，按“2.2.3项”下方法测定吸光度并计算多糖含量，结果太子参中多糖平均含量为34.39%，RSD为2.30%，表明该方法重复性良好。
2.2.7 加样回收试验 精密称取已知含量的太子参（粉碎过3号筛）0.0500g，9份，精密称定，分别加入葡萄糖对照品适量，使得高、中、低浓度对照品加入量与供试品中多糖含量之比约为0.5∶1、1∶1、1.5∶1各3份，按“2.2.2项”下方法制备样品溶液，按“2.2.3项”下方法测定吸光度并计算回收率。多糖的平均加样回收率为97.03%、101.13%、102.15%。
2.2.8 样品多糖含量测定 分别称取“柘参2号”与“柘参3号”太子参（粉碎过3号筛）0.1000g，精密称定，每个批次平行3份，按“2.2.2项”下方法制备样品溶液，按“2.2.3项”下方法测定吸光度，计算各批次太子参药材中多糖含量。
2.3 结果 “柘参2号”与“柘参3号”太子参水溶性浸出物及多糖含量测定结果由表1、表2可知，两个品种太子参水溶性浸出物含量范围在29.78%～45.83%之间，其中“柘参2号”太子参浸出物含量范围主要在32%～36 %之间，“柘参3号”太子参浸出物含量范围主要在38%～42%之间;两个品种太子参多糖含量范围在31.14%～41.48%之间，其中“柘参2号”太子参多糖含量范围主要在31%～35 %之间，“柘参3号”太子参多糖含量范围主要在35%～40%之间。
3 结论
浸出物可反映药材中化学成分总体积累水平，2015年版《中华人民共和国药典》要求太子参水溶性浸出物含量不得低于25%，其在太子参品质检测中作为一项重要的衡量标准[3]。本研究分别进行“柘参2号”和“柘参3号”15批次太子参的水溶性浸出物测定，其含量均符合药典要求。“柘参3号”太子参浸出物和多糖含量均显著高于“柘参2号”，说明新品种“柘参3号”太子参在浸出物、多糖含量指标方面优于“柘参2号”。
多糖是太子参中一类重要的水溶性成分，也是太子参中重要的有效成分。国内学者及本课题组研究表明，太子参多糖抗心肌缺血、增强人体免疫力，具有降低血糖、血脂、改善胰岛素抵抗等作用[4-7];已有较多学者研究太子参中多糖含量，以此作为太子参质量评价的重要指标之一[8-11]。研究通过对“柘参2号”与“柘参3号”太子参水溶性浸出物和多糖含量的测定，考察了“柘参2号”与“柘参3号”新品种太子参浸出物和多糖含量的差异性，“柘参3号”太子参在浸出物、多糖含量指标方面优于“柘参2号”。
综上，本研究从多糖及浸出物含量两个指标，初步考察“柘参3号”太子参的质量信息，为评价太子参新品种质量提供一定的数据基础;为客观反映新品种质量，还应从活性化学成分、药效学等多方面进行深入系统研究。
参考文献
[1]袁济端. 太子参新品种柘参1号、柘参2号的选育[J]. 广西热带农业， 2007（6）：39-41.
[2]Ye Zuyun， Wang Yaying， Tian Huiqiao. Regeneration of plantlets and tetraploidy induction in Pseudostellaria heterophylla[J]. Acta Biologica Cracoviensia Series Botanica， 2009， 51（2）：13-18.
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（收稿日期：2018-11-28 编辑：程鹏飞）