【摘 要】
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目的构建表达大鼠CXCR4基因的慢病毒载体,建立CXCR4基因过表达骨髓间充质干细胞株。方法PCR克隆CXCR4基因,将其连接到慢病毒表达载体PGMLV-6751上,转染293细胞,将构建的重组
【机 构】
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昆明医科大学第四附属医院重症医学科
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(No.81360289);云南省科技厅-昆明医科大学联合专项重点项目[No.2017FE468(-180)]、面上项目(No.2012FB076);云南省高层次卫生计生技术人才培养项目(H-2017060);昆明医科大学研究生创新基金项目(No.2018S048)
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目的构建表达大鼠CXCR4基因的慢病毒载体,建立CXCR4基因过表达骨髓间充质干细胞株。方法PCR克隆CXCR4基因,将其连接到慢病毒表达载体PGMLV-6751上,转染293细胞,将构建的重组慢病毒载体与包装质粒混合物共转染293T细胞,收集病毒悬液,测定滴度,转染SD大鼠骨髓间充质干细胞,以嘌呤霉素进行筛选,定量PCR和Western blot检测转染后细胞目的基因mRNA和蛋白的表达水平。结果成功构建了表达CXCR4基因的慢病毒载体,病毒滴度为2×10^8 TU/mL,建立了CXCR4基因
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