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摘要：应用冻干制品加速热稳定性试验，测试三组冻干保护剂配方对鸡传染性支气管炎（H120株）活疫苗的耐热保护效果。结果表明A配方的耐热保护剂效果最好，使用该保护剂的疫苗表现为37℃放置10d后，病毒含量下降在0.6～0.8个滴度。
关键词：鸡传染性支气管炎；耐热保护剂；热稳定性试验
鸡传染性支气管炎活疫苗是我国养禽业使用普遍的疫苗。目前，国内疫苗生产企业常用的保护剂为牛奶、明胶、蔗糖，疫苗的耐热性能较差，通常要求在-15℃条件下冷冻保存，给疫苗运输带来很大的不便。而进口冻干活疫苗基本上都使用了耐热型冻干保护剂，能使疫苗在2—8℃环境中保存24个月左右[1]。国内近些年也有多项畜禽用耐热保护剂活疫苗新兽药产品上市销售。本研究以鸡传染性支气管炎病毒H120株为对象，成功的筛选出一个耐热保护剂，并获得良好的效果。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1毒种鸡传染性支气管炎H120株，购自中国兽医药品监察所，由瑞普（保定）生物药业有限公司鉴定、保存。
1.1.2保护剂明胶、蔗糖、山梨醇、谷氨酸钠、精氨酸等，均为分析纯，购自天津科密欧生物技术有限公司。
1.1.3 SPF鸡胚由瑞普（保定）生物药业有限公司提供。
1.2方法
1.2.1制苗用抗原液的制备按《规程》方法[2进行制苗用抗原的制备及半成品检验。
1.2.2耐热冻干保护剂的筛选用明胶、蔗糖、山梨醇、谷氨酸钠、精氨酸等组成三个配方。取制备的H120病毒液与不同配方的保护剂，按1：1的比例混合，定量分装。以5%蔗糖脱脂奶粉疫苗作对照组，同时进行冷冻真空干燥，观察冻干制品的性状并测定冻干前后及37℃放置10d的效价，依据结果对保护剂进行初步筛选。
1.2.3耐热保护剂的优化
1）疫苗生产：按1.2.2方法中筛选出的最佳保护剂冻干3批鸡传染性支气管炎耐热保护剂活疫苗，批号分别为201 50101、20150102、20150103。
2）疫苗检验：分别按《规程》方法检测制备疫苗的物理性状、真空度、和剩余水分。
3）热稳定性试验：疫苗冻干后，随机抽取3批疫苗和1批普通对照疫苗，37℃放置10d。按现行《规程》方法对样品进行EID50测定。
1.2.4同類制品的比较试验将同类制品置37℃10d、15d，分别测定EIDso。
2结果
2.1耐热冻千保护剂的筛选
耐热冻干保护剂的筛选结果见表1，A保护剂的保护效果最好，冻干损失小，37℃放置10d，EID50下降0.6个滴度。
2.2疫苗检验
3批活疫苗检验结果见表2，生产的3批疫苗经检验均符合《规程》的各项要求。3批鸡传染性支气管炎耐热保护剂活疫苗37℃放置10d后，耐热前后效价下降在0.6～0.8个滴度之间。
2.3同类制品的比较试验
与同类制品的比较试验结果见表3，20150101批37℃放置10d病毒效价下降0.6个滴度，15d下降0.8个滴度。国外产品37℃放置10d病毒效价下降0.8个滴度，15d下降大于1个滴度。国内产品37℃放置10d病毒效价下降1个滴度，15d下降大于1个滴度。说明本耐热保护剂配方冻干品37℃热稳定性达到或超过国外厂家同类产品。
3讨论
在筛选保护剂配方时，大分子与小分子物质配合使用。在冻干过程中大分子物质组成的耐热性构架，阻断构架外热源对构架内病毒和细菌的热传导性和热辐射性杀伤，这种构架增强对病毒或细菌具有保护作用，而且可促进冷冻干燥构成中的升华。小分子物质可形成均匀悬液，使悬浮于耐热保护剂中的病毒或细菌在冷冻干燥过程中尽量保持存活的状态，起直接保护病毒和细菌的作用。使干燥样品中的最终水分含量不致过低，防止蛋白质变性，减少病毒或细菌失活。
参考文献：
[1]王冬，张中秋.畜禽重大疫病免疫防制研究进展[M].北京中国农业出版社.1996：169-177
[2]中华人民共和国农业部中华人民共和国兽用生物制品制造及检验规程[S].2000
关键词：鸡传染性支气管炎；耐热保护剂；热稳定性试验
鸡传染性支气管炎活疫苗是我国养禽业使用普遍的疫苗。目前，国内疫苗生产企业常用的保护剂为牛奶、明胶、蔗糖，疫苗的耐热性能较差，通常要求在-15℃条件下冷冻保存，给疫苗运输带来很大的不便。而进口冻干活疫苗基本上都使用了耐热型冻干保护剂，能使疫苗在2—8℃环境中保存24个月左右[1]。国内近些年也有多项畜禽用耐热保护剂活疫苗新兽药产品上市销售。本研究以鸡传染性支气管炎病毒H120株为对象，成功的筛选出一个耐热保护剂，并获得良好的效果。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1毒种鸡传染性支气管炎H120株，购自中国兽医药品监察所，由瑞普（保定）生物药业有限公司鉴定、保存。
1.1.2保护剂明胶、蔗糖、山梨醇、谷氨酸钠、精氨酸等，均为分析纯，购自天津科密欧生物技术有限公司。
1.1.3 SPF鸡胚由瑞普（保定）生物药业有限公司提供。
1.2方法
1.2.1制苗用抗原液的制备按《规程》方法[2进行制苗用抗原的制备及半成品检验。
1.2.2耐热冻干保护剂的筛选用明胶、蔗糖、山梨醇、谷氨酸钠、精氨酸等组成三个配方。取制备的H120病毒液与不同配方的保护剂，按1：1的比例混合，定量分装。以5%蔗糖脱脂奶粉疫苗作对照组，同时进行冷冻真空干燥，观察冻干制品的性状并测定冻干前后及37℃放置10d的效价，依据结果对保护剂进行初步筛选。
1.2.3耐热保护剂的优化
1）疫苗生产：按1.2.2方法中筛选出的最佳保护剂冻干3批鸡传染性支气管炎耐热保护剂活疫苗，批号分别为201 50101、20150102、20150103。
2）疫苗检验：分别按《规程》方法检测制备疫苗的物理性状、真空度、和剩余水分。
3）热稳定性试验：疫苗冻干后，随机抽取3批疫苗和1批普通对照疫苗，37℃放置10d。按现行《规程》方法对样品进行EID50测定。
1.2.4同類制品的比较试验将同类制品置37℃10d、15d，分别测定EIDso。
2结果
2.1耐热冻千保护剂的筛选
耐热冻干保护剂的筛选结果见表1，A保护剂的保护效果最好，冻干损失小，37℃放置10d，EID50下降0.6个滴度。
2.2疫苗检验
3批活疫苗检验结果见表2，生产的3批疫苗经检验均符合《规程》的各项要求。3批鸡传染性支气管炎耐热保护剂活疫苗37℃放置10d后，耐热前后效价下降在0.6～0.8个滴度之间。
2.3同类制品的比较试验
与同类制品的比较试验结果见表3，20150101批37℃放置10d病毒效价下降0.6个滴度，15d下降0.8个滴度。国外产品37℃放置10d病毒效价下降0.8个滴度，15d下降大于1个滴度。国内产品37℃放置10d病毒效价下降1个滴度，15d下降大于1个滴度。说明本耐热保护剂配方冻干品37℃热稳定性达到或超过国外厂家同类产品。
3讨论
在筛选保护剂配方时，大分子与小分子物质配合使用。在冻干过程中大分子物质组成的耐热性构架，阻断构架外热源对构架内病毒和细菌的热传导性和热辐射性杀伤，这种构架增强对病毒或细菌具有保护作用，而且可促进冷冻干燥构成中的升华。小分子物质可形成均匀悬液，使悬浮于耐热保护剂中的病毒或细菌在冷冻干燥过程中尽量保持存活的状态，起直接保护病毒和细菌的作用。使干燥样品中的最终水分含量不致过低，防止蛋白质变性，减少病毒或细菌失活。
参考文献：
[1]王冬，张中秋.畜禽重大疫病免疫防制研究进展[M].北京中国农业出版社.1996：169-177
[2]中华人民共和国农业部中华人民共和国兽用生物制品制造及检验规程[S].2000