【摘 要】
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为改进户尘螨过敏原提取方法 ,在采用Coca s液、裂解液及Trizol法提取纯种户尘螨螨体蛋白后 ,用二喹啉甲酸 (BCA)检测法测定蛋白质含量 ,双向电泳比较上述蛋白提取方法的效果
【机 构】
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中国医学科学院,北京放射医学研究所
【基金项目】
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科技部创新药物和中药现代化博士基金 (2 0 0 3AA2Z35 0 2 )
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为改进户尘螨过敏原提取方法 ,在采用Coca s液、裂解液及Trizol法提取纯种户尘螨螨体蛋白后 ,用二喹啉甲酸 (BCA)检测法测定蛋白质含量 ,双向电泳比较上述蛋白提取方法的效果。结果显示 ,在蛋白质回收率方面 ,裂解液优于Trizol法优于Coca s液。经过双向电泳 ,Coca s液提取的蛋白仅仅有少量低分子量的蛋白点 ;用裂解液提取的蛋白可见明显增多低分子量的蛋白点 ,但无中分子量的蛋白点 ;Trizol法提取的蛋白可见中分子量的蛋白点如174~ 178ku和 133 0ku的蛋白质。另外 ,纯种户尘螨螨体经Trizol液提取后进行双向电泳 ,在考染和银染时均出现 5个高丰度的特殊蛋白点 ,一个为酸性中分子量蛋白 ,位置孤立的 ;另有 4个位置彼此非常接近的中性蛋白点。比较后结论为使用Coca s液提取的尘螨蛋白质浓度低 ,蛋白点少。使用裂解液提取的尘螨蛋白质浓度虽然较高 ,但是没有中分子量的蛋白点 ,不能全面反映尘螨的过敏原。使用Trizol法提取的蛋白质浓度中等 ,有中分子量蛋白点 ,反映的蛋白点更加全面。纯种户尘螨螨体经Trizol液提取后进行双向电泳 ,在考染和银染时出现的特征性蛋白点 ,作为一种双向电泳的指纹图谱 ,在鉴定此种纯种户尘螨螨体时具有一定的价值。
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