【摘 要】
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目的 探究微小RNA 27b(miR-27b)调控PTEN诱导性激酶蛋白1(PINK1)/E3泛素连接酶(parkin)通路参与大鼠癫痫发作的机制.方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-27b NC组、miR-27b拮抗剂组、miR-27b拮抗剂+H89(PINK1上游因子PKA抑制剂)组,每组12只.除对照组外,其他组大鼠均构建癫痫大鼠模型.实验结束后观察大鼠行为学变化.qRT-PCR检测miR-27b表达.HE染色观察大鼠海马组织病理学变化.透射电镜观察海马CA1区线粒体超微结构.免疫组化法
【机 构】
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成都医学院第二附属医院核工业四一六医院神经外科,成都610051
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目的 探究微小RNA 27b(miR-27b)调控PTEN诱导性激酶蛋白1(PINK1)/E3泛素连接酶(parkin)通路参与大鼠癫痫发作的机制.方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-27b NC组、miR-27b拮抗剂组、miR-27b拮抗剂+H89(PINK1上游因子PKA抑制剂)组,每组12只.除对照组外,其他组大鼠均构建癫痫大鼠模型.实验结束后观察大鼠行为学变化.qRT-PCR检测miR-27b表达.HE染色观察大鼠海马组织病理学变化.透射电镜观察海马CA1区线粒体超微结构.免疫组化法检测DRP1蛋白表达情况.Western blot检测各组海马组织中PINK1/parkin通路及自噬相关蛋白表达情况.结果 与对照组相比,模型组和miR-27b NC组大鼠精神萎靡、饮食不佳、体形消瘦、皮毛光泽暗淡脏乱,神经细胞、线粒体损伤严重.与模型组相比,miR-27b拮抗剂组大鼠精神、饮食、皮毛状态、神经细胞及线粒体损伤程度有所改善.与miR-27b拮抗剂组相比,miR-27b拮抗剂+H89组大鼠精神、饮食、皮毛状态不佳、神经细胞及线粒体损伤程度加重.与对照组相比,模型组miR-27b表达水平、DRP1阳性细胞数显著增加,而PINK1、parkin、Beclin-1和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平显著降低(均P<0.05).与模型组相比,miR-27b拮抗剂组发作次数、miR-27b表达水平、DRP1阳性细胞数显著降低,而发作潜伏期、PINK1、parkin、Bec-lin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平显著增加(P<0.05).与miR-27b拮抗剂组相比,miR-27b拮抗剂+H89组发作次数、DRP1阳性细胞数显著增加,而发作潜伏期、PINK1、parkin、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平显著降低(均P<0.05).结论 miR-27b表达沉默可通过促进PINK1/parkin信号通路改善大鼠癫痫程度.
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