【摘 要】
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目的:克隆人α-半乳糖苷酶A(α-GalA)cDNA,并在毕赤酵母中表达重组的人α-GalA.方法:利用RT-PCR方法从人肝癌细胞中克隆人α-半乳糖苷酶A cDNA并构建到可用甲醇诱导的分泌型
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(973计划)
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目的:克隆人α-半乳糖苷酶A(α-GalA)cDNA,并在毕赤酵母中表达重组的人α-GalA.方法:利用RT-PCR方法从人肝癌细胞中克隆人α-半乳糖苷酶A cDNA并构建到可用甲醇诱导的分泌型巴氏毕赤酵母表达载体pPICZαA 中.将重组质粒导入毕赤酵母并用Zeion抗生素筛选转化细胞.在甲醇诱导后,利用SDS-PAGE 、Western 印迹及酶活测定方法在酵母上清中鉴定重组的人α-GalA.结果:获得人α-GalA cDNA,构建酵母表达质粒pHGCZɑA,将重组表达载体导入到酵母细胞,并在上清中检测到人α-GalA蛋白.结论:获得了人α-GalA cDNA及具有生物活性的重组人α-GalA,为临床应用于法布莱氏病的治疗奠定了基础..
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